本發(fā)明公開一種環(huán)介導(dǎo)的級(jí)聯(lián)放大策略用于高靈敏檢測(cè)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性，基于鏈置換放大和指數(shù)型滾環(huán)擴(kuò)增，設(shè)計(jì)了一種長(zhǎng)莖環(huán)探針，其包括用于DNA甲基轉(zhuǎn)移酶識(shí)別的甲基化位點(diǎn)、用于確保探針穩(wěn)定的長(zhǎng)莖部和用于引發(fā)后續(xù)放大的環(huán)部。長(zhǎng)莖環(huán)探針中環(huán)部和小部分的莖部作為觸發(fā)鏈用于后續(xù)的信號(hào)輸出過程。該觸發(fā)鏈被長(zhǎng)莖部完全封閉在探針的環(huán)部，避免探針泄漏所引起的非特異性放大。長(zhǎng)莖環(huán)探針被DNA甲基轉(zhuǎn)移酶甲基化，且隨后被限制性內(nèi)切酶切割，產(chǎn)生觸發(fā)鏈。在聚合酶和切割酶的協(xié)同作用下，所產(chǎn)生的觸發(fā)鏈引發(fā)鏈置換放大，產(chǎn)生大量引物。所產(chǎn)生的引物引發(fā)指數(shù)滾環(huán)擴(kuò)增，合成大量G?四倍體序列，與染料相互作用而獲得增強(qiáng)的熒光信號(hào)。

1.一種非疾病診斷和治療目的的檢測(cè)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性的方法，其特征是，具體包括以下：a、當(dāng)待測(cè)樣品中存在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶時(shí)，所述DNA甲基轉(zhuǎn)移酶特異性識(shí)別和催化長(zhǎng)莖環(huán)探針發(fā)生甲基化，形成具有甲基化的長(zhǎng)莖環(huán)；所述長(zhǎng)莖環(huán)探針的序列為SEQ ID NO:1、SEQID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:9所示；b、甲基化敏感型限制性內(nèi)切酶將甲基化的長(zhǎng)莖環(huán)切割成兩部分，一部分為雙鏈DNA，另一部分為新發(fā)夾探針，所述新發(fā)夾探針結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，發(fā)生構(gòu)象轉(zhuǎn)變成單鏈DNA形成觸發(fā)鏈；c、所述觸發(fā)鏈與鏈置換模板發(fā)夾探針雜交，并在鏈置換擴(kuò)增活性的聚合酶和切割酶的作用下引發(fā)聚合和切割反應(yīng)，釋放出多個(gè)引物；d、在DNA連接酶的作用下所釋放的引物與掛鎖探針雜交得到環(huán)狀探針；所述掛鎖探針序列如SEQ ID NO:13所示；e、所釋放的引物在滾環(huán)擴(kuò)增活性的聚合酶作用下觸發(fā)滾環(huán)擴(kuò)增，合成含多個(gè)串聯(lián)的富含G序列的長(zhǎng)DNA產(chǎn)物；f、切割酶切割所述長(zhǎng)DNA產(chǎn)物和掛鎖探針雜交所形成的雙鏈DNA，產(chǎn)生富含G的序列和所述引物，所述引物繼續(xù)用于引發(fā)下級(jí)滾環(huán)擴(kuò)增；g、在金屬離子的作用下，富含G的序列折疊成G-四倍體結(jié)構(gòu)，其選擇性與染料作用得到增強(qiáng)的熒光信號(hào)，即測(cè)得DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的活性；所述方法為非疾病診斷與治療方法。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟b中，所述甲基化敏感型限制性內(nèi)切酶為各種類型DNA甲基轉(zhuǎn)移酶所對(duì)應(yīng)的限制性內(nèi)切酶；步驟c中，所述發(fā)夾探針包括莖環(huán)序列和連接在其莖部序列上的懸垂單鏈；其中，所述莖環(huán)序列中包括釋放滾環(huán)擴(kuò)增時(shí)的引物的互補(bǔ)序列和切割酶特異性識(shí)別序列，所述懸垂單鏈與觸發(fā)鏈互補(bǔ)；所述鏈置換擴(kuò)增活性的聚合酶為Klenow Fragment聚合酶；所述切割酶為Nt.BbvCI酶；所釋放出的引物序列能夠特異性滾環(huán)擴(kuò)增出所述掛鎖探針互補(bǔ)序列富含G的序列；步驟d中，所述DNA連接酶為T4連接酶；所述掛鎖探針包括若干個(gè)富含C序列，相鄰的富含C序列之間為切割酶的特性識(shí)別位點(diǎn)序列，步驟e中，所述滾環(huán)擴(kuò)增活性的聚合酶為Phi29 DNA聚合酶；步驟f中，所述切割酶為Nt.BbvCI酶；步驟g中，所述金屬離子為K⁺，所述染料為N-甲基卟啉二丙酸IX。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，具體包括以下操作步驟：（1）向待測(cè)樣品中加入長(zhǎng)莖環(huán)探針和甲基化敏感型限制性內(nèi)切酶進(jìn)行孵育；（2）向步驟（1）反應(yīng)得到的體系中加入發(fā)夾探針、鏈置換擴(kuò)增活性的聚合酶、切割酶和擴(kuò)增原料dNTPs進(jìn)行孵育，發(fā)生鏈置換反應(yīng)，釋放用于后續(xù)擴(kuò)增的引物；然后進(jìn)行酶失活；（3）向步驟（2）反應(yīng)得到的體系加入DNA連接酶和掛鎖探針進(jìn)行孵育，所釋放的引物與掛鎖探針雜交得到環(huán)狀探針；（4）向步驟（3）反應(yīng)得到的體系中加入滾環(huán)擴(kuò)增活性的聚合酶、切割酶和擴(kuò)增原料dNTPs進(jìn)行孵育，發(fā)生滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)；（5）向步驟（4）反應(yīng)得到的體系中加入金屬離子和染料進(jìn)行孵育，然后檢測(cè)熒光信號(hào)。4. 一種進(jìn)行DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑/拮抗劑篩選的方法，其特征是：加入候選抑制劑/拮抗劑和所述長(zhǎng)莖環(huán)探針，進(jìn)行孵育，然后加入DNA 甲基化轉(zhuǎn)移酶；后續(xù)步驟如權(quán)利要求1的步驟b~g。