一種核酸的檢測方法。涉及核酸的檢測技術(shù)，提供一種靈敏度高、精確度高、成本低、簡便快速的核酸的檢測方法及其核酸膜層析雜交試紙條。所述核酸膜層析雜交試紙條包括加樣墊、靶核酸序列捕獲探針、層析膜、吸水墊和底襯，所述層析膜粘貼于底襯的中部，所述加樣墊和吸水墊分別粘貼于所述層析膜兩端，所述靶核酸序列捕獲探針呈直線狀固定在所述加樣墊和吸水墊之間的層析膜上。將多色熒光標記探針與膜層析技術(shù)相結(jié)合，通過熒光和物理位置兩個參數(shù)區(qū)分樣品中的模板類型，實現(xiàn)了核酸快速的分型檢測。核酸檢測的靈敏度高，檢測靈敏度可達10拷貝/反應(yīng)。核酸檢測特異性高，特異性由引物、檢測探針和捕獲探針共同保證，使結(jié)果更加穩(wěn)定，更加準確。

1.一種核酸的檢測方法，其特征在于其包括以下步驟：
1）根據(jù)待測樣品的核酸序列，設(shè)計PCR擴增的引物、靶核酸序列檢測探針和靶核酸序
列捕獲探針；所述靶核酸序列檢測探針的熔點低于所述PCR擴增體系的退火溫度，所述靶核
酸序列檢測探針至少有兩種且標記有熒光染料，所述靶核酸序列捕獲探針用生物素標記；
2）并將步驟1）設(shè)計好的的引物和靶核酸序列檢測探針加入PCR擴增反應(yīng)體系中，對待
測樣品進行PCR擴增，獲得PCR擴增產(chǎn)物，所述PCR擴增產(chǎn)物中的靶核酸序列與所述靶核
酸序列檢測探針形成二元雜交復(fù)合物；
3）將步驟2）所得PCR擴增產(chǎn)物置于含有步驟1）中靶核酸序列捕獲探針的核酸膜層
析雜交試紙條上進行膜層析分離，所述核酸膜層析雜交試紙條上的靶核酸序列捕獲探針捕獲
PCR擴增產(chǎn)物中的二元雜交復(fù)合物，形成三元雜交復(fù)合物；
4）通過熒光掃描儀讀取步驟3）中的三元雜交復(fù)合物中的熒光信號，分析所得熒光信號
即得核酸檢測結(jié)果。
2.如權(quán)利要求1所述一種核酸的檢測方法，其特征在于在步驟3）中，所述核酸膜層析
雜交試紙條包括加樣墊、靶核酸序列捕獲探針、層析膜、吸水墊和底襯，所述層析膜粘貼于
底襯的中部，所述加樣墊和吸水墊分別粘貼于所述層析膜兩端，所述靶核酸序列捕獲探針呈
直線狀固定在所述加樣墊和吸水墊之間的層析膜上。
3.如權(quán)利要求2所述一種核酸的檢測方法，其特征在于所述加樣墊為玻璃纖維，所述靶
核酸序列捕獲探針帶有熒光染料，所述層析膜為尼龍膜、PVDF膜、聚酯膜、硝酸纖維素膜、
醋酸纖維素膜中的一種；所述吸水墊為棉仔絨、棉纖維或纖維素，所述底襯為聚氯乙烯或聚
苯乙烯。
4.如權(quán)利要求1所述一種核酸的檢測方法，其特征在于在步驟3）中，所述核酸膜層析
雜交試紙條的制備方法包括以下步驟：
1）將層析膜粘貼底襯的中部；
2）將加樣墊和吸水墊分別粘貼于步驟1）所述層析膜的兩端，并分別與層析膜相連接；
3）將靶核酸序列捕獲探針呈直線狀固定在所述加樣墊和吸水墊之間的層析膜上，即得核
酸膜層析雜交試紙條。
5.如權(quán)利要求4所述一種核酸的檢測方法，其特征在于在步驟3）中，所述固定采用親
和素或抗體結(jié)合的方式。