本發(fā)明公開了一種基于液相芯片檢測傳染性造血器官壞死病毒的方法。本發(fā)明提供了輔助鑒定傳染性造血器官壞死病毒的特異引物對，由序列表的序列1所示的單鏈DNA分子和序列表的序列2所示的單鏈DNA分子組成。本發(fā)明還保護輔助鑒定傳染性造血器官壞死病毒的引物探針組合物，由所述特異引物對和探針T1組成；所述探針T1的核苷酸序列如序列表的序列3所示。采用本發(fā)明提供的特異引物對鑒定傳染性造血器官壞死病毒具有良好的特異性。采用本發(fā)明提供的引物探針組合物結(jié)合液相芯片鑒定傳染性造血器官壞死病毒，具有特異性好、靈敏度高、操作簡便、所需時間短、不污染環(huán)境、不存在對人的健康威脅，可以進行高通量檢測的優(yōu)點。

1.輔助鑒定傳染性造血器官壞死病毒的特異引物對，由序列表的序列1所示的單
鏈DNA分子和序列表的序列2所示的單鏈DNA分子組成。
2.輔助鑒定傳染性造血器官壞死病毒的引物探針組合物，由權(quán)利要求1所述特異
引物對和探針T1組成；所述探針T1的核苷酸序列如序列表的序列3所示。
3.權(quán)利要求1所述特異引物對或權(quán)利要求2所述引物探針組合物在制備輔助鑒定
傳染性造血器官壞死病毒的試劑盒中的應(yīng)用。
4.輔助鑒定傳染性造血器官壞死病毒的試劑盒，包括權(quán)利要求1所述特異引物對。
5.輔助鑒定傳染性造血器官壞死病毒的試劑盒，包括權(quán)利要求2所述引物探針組
合物；所述試劑盒輔助鑒定傳染性造血器官壞死病毒時的使用方法包括如下步驟：
(1)以待測病毒的總RNA為模板，用所述特異引物對進行RT-PCR擴增；
(2)制備微球懸液
①將表面羧基化的熒光編碼微球漩渦振蕩20s，取75μL置于1.5mL離心管中，
10000g離心1min，棄上清；
②在步驟①的離心管中加入50μL?pH4.5、0.1mol/L?N-甲基咪唑水溶液，漩渦混
合，超聲波處理30-60秒；
③在步驟②的離心管中加入1.0nmol所述探針T1，漩渦混合；
④在步驟③的離心管中加入2.5μL碳二亞胺溶液，充分混勻，室溫避光孵育30min；
所述碳二亞胺溶液的制備方法：將10mg碳二亞胺粉末加入1.0mL的滅菌純水；
⑤在步驟④的離心管中加入2.5μL碳二亞胺溶液充分混勻，室溫避光孵育30min；
⑥在步驟⑤的離心管中加入1.0mL0.02g/100mL?Tween-20水溶液，混勻，10000g
離心1min，棄上清；
⑦在步驟⑥的離心管中加入1.0mL0.1g/100mL?SDS水溶液，混勻，10000g離心
1min，棄上清；
⑧在步驟⑦的離心管中加入100μL?pH4.5、0.1mol/L?N-甲基咪唑水溶液，重懸，
得到微球懸液；
(3)將步驟(1)的產(chǎn)物和步驟(2)得到的微球懸液進行雜交即為實驗組，用
TE緩沖液代替步驟(1)的產(chǎn)物即為對照組；將雜交體系混合均勻后于98℃變性10min，
然后在與雜交溫度相同的溫度下孵育15min，18000g離心2min，棄上清；然后加入50μL
用1×TMAC雜交液稀釋至500倍體積的SA-PE，52℃雜交15min，18000g離心2min，
棄上清；然后加入50μL1×TMAC雜交液，漩渦混合使微球重懸，置于BD?FACSArray
液相芯片儀中進行分析；如果LQRR≥3，檢測結(jié)果為陽性；如果LQRR＜2，檢測結(jié)果為
陰性；LQRR＝MFIS/MFIB，MFIS為實驗組的熒光強度中位值，MFIB為對照組的熒光強
度中位值。