本發(fā)明公開了一種檢測(cè)樣品中多個(gè)過敏原的方法，包括：制備可視薄膜傳感器芯片，其中在同一個(gè)芯片基質(zhì)表面上分別固定對(duì)應(yīng)于多個(gè)過敏原DNA序列的多個(gè)特異性探針；利用對(duì)應(yīng)于多個(gè)過敏原DNA序列的多對(duì)特異性上游引物和下游引物對(duì)檢測(cè)樣品的DNA序列進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增，其中下游引物的5’端帶有共價(jià)結(jié)合的生物素；將步驟(2)的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與可視化芯片上的探針進(jìn)行雜交，并洗滌；用辣根過氧化酶標(biāo)記的生物素抗體與芯片進(jìn)行雜交，并洗脫未雜交的鏈；用辣根過氧化物酶的底物對(duì)芯片進(jìn)行處理和顯色；根據(jù)是否產(chǎn)生可視信號(hào)以及產(chǎn)生的可視信號(hào)對(duì)應(yīng)的探針位置，確定檢測(cè)樣品中是否含有過敏原以及含有過敏原的種類。本發(fā)明的方法能快速、高通量且能同時(shí)檢測(cè)樣品中是否存在多種過敏原。

1.一種檢測(cè)樣品中多個(gè)過敏原的檢測(cè)方法，包括：
(1)制備可視薄膜傳感器芯片，其中在同一個(gè)芯片基質(zhì)表面上分別固定
對(duì)應(yīng)于多個(gè)過敏原DNA序列的多個(gè)特異性探針；
(2)利用對(duì)應(yīng)于多個(gè)過敏原DNA序列的多對(duì)特異性上游引物和下游引
物對(duì)檢測(cè)樣品的DNA序列進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增，其中下游引物的5’端帶有共
價(jià)結(jié)合的生物素；
(3)將步驟(2)的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與可視化芯片上的探針進(jìn)行雜交，并
洗滌；
(4)用辣根過氧化酶標(biāo)記的生物素抗體與芯片進(jìn)行雜交，并洗脫未雜交
的鏈；
(5)用辣根過氧化物酶的底物對(duì)芯片進(jìn)行處理和顯色；
(6)根據(jù)是否產(chǎn)生可視信號(hào)以及產(chǎn)生的可視信號(hào)對(duì)應(yīng)的探針位置，確定
檢測(cè)樣品中是否含有過敏原以及含有過敏原的種類，
其中，所述過敏原選自大豆、花生、小麥、腰果、雞蛋、牛奶、魚和蝦，
分別對(duì)應(yīng)于該8種過敏原的DNA序列的8種特異性探針為：SEQ?ID?NO：3、
6、9、12、15、18、21、24，對(duì)應(yīng)于所述8種過敏原的DNA序列的8對(duì)特
異性上游引物和下游引物分別為：SEQ?ID?NO：1-2、4-5、7-8、10-11、13-14、
16-17、19-20、22-23。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟(1)中的
可視薄膜傳感器芯片的基質(zhì)表面上還固定有陽性對(duì)照序列，所述陽性對(duì)照序
列的3’端帶有共價(jià)結(jié)合的生物素；所述陽性對(duì)照序列優(yōu)選為SEQ?ID?NO：25。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟(1)中，
在同一個(gè)芯片基質(zhì)表面上所固定的對(duì)應(yīng)于每個(gè)過敏原DNA序列的特異性探
針至少有兩個(gè)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述多個(gè)過
敏原為大豆、花生、小麥、腰果，所使用的分別對(duì)應(yīng)于大豆、花生、小麥、
腰果過敏原DNA序列的多個(gè)特異性探針分別為SEQ?ID?NO：3、6、9、12，
對(duì)應(yīng)于大豆、花生、小麥、腰果過敏原DNA序列的特異性上游引物和下游
引物分別為SEQ?ID?NO：1-2、4-5、7-8、10-11；雞蛋、牛奶、魚和蝦，所使
用的分別對(duì)應(yīng)于雞蛋、牛奶、魚和蝦過敏原DNA序列的多個(gè)特異性探針分
別為SEQ?ID?NO：15、18、21、24，分別對(duì)應(yīng)于雞蛋、牛奶、魚和蝦過敏原
DNA序列的特異性上游引物和下游引物分別為SEQ?ID?NO：13-14、16-17、
19-20、22-23；或者大豆、花生、小麥、腰果、雞蛋、牛奶、魚和蝦，分別
對(duì)應(yīng)于該8種過敏原DNA序列的8種特異性探針為：SEQ?ID?NO：3、6、9、
12、15、18、21、24，利用對(duì)應(yīng)于所述8種過敏原DNA序列的8對(duì)特異性
上游引物和下游引物：SEQ?ID?NO：1-2、4-5、7-8、10-11、13-14、16-17、19-20、
22-23對(duì)檢測(cè)樣品的DNA序列進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增。
5.一種用于檢測(cè)樣品中過敏原的可視薄膜傳感器芯片，其中在同一個(gè)芯
片基質(zhì)表面上分別固定對(duì)應(yīng)于多個(gè)過敏原DNA序列的多個(gè)特異性探針，其
中，所述過敏原選自大豆、花生、小麥、腰果、雞蛋、牛奶、魚和蝦，分別
對(duì)應(yīng)于該8種過敏原的DNA序列的8種特異性探針為：SEQ?ID?NO：3、6、
9、12、15、18、21、24。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的可視薄膜傳感器芯片，其特征在于，所述可視
薄膜傳感器芯片的基質(zhì)表面上還固定有陽性對(duì)照序列，所述陽性對(duì)照序列的
3’端帶有共價(jià)結(jié)合的生物素。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的可視薄膜傳感器芯片，其特征在于，在同一個(gè)
芯片基質(zhì)表面上所固定的對(duì)應(yīng)于每個(gè)過敏原DNA序列的特異性探針至少有
兩個(gè)。
8.根據(jù)權(quán)利要求5-7中任一所述的可視薄膜傳感器芯片，其特征在于，
所述多個(gè)過敏原為大豆、花生、小麥、腰果，所使用的分別對(duì)應(yīng)于大豆、花
生、小麥、腰果過敏原DNA序列的多個(gè)特異性探針分別為SEQ?ID?NO：3、
6、9、12；雞蛋、牛奶、魚和蝦，所使用的分別對(duì)應(yīng)于雞蛋、牛奶、魚和蝦
過敏原DNA序列的多個(gè)特異性探針分別為SEQ?ID?NO：15、18、21、24；
或者大豆、花生、小麥、腰果、雞蛋、牛奶、魚和蝦，分別對(duì)應(yīng)于該8種過
敏原DNA序列的8種特異性探針為：SEQ?ID?NO：3、6、9、12、15、18、
21、24。