本發明提供了一種豬瘟病毒、豬圓環病毒2型和豬繁殖與呼吸綜合征病毒歐洲型與美洲型基因芯片檢測方法，基因芯片采用如下表所示的探針序列：<tables num="0001"></tables>本發明采用該基因芯片對豬瘟、豬圓環病毒病和豬繁殖與呼吸綜合征三種疾病同時進行檢測的方法。解決了現有檢測技術費時費力和特異性差，或只能對單一病種進行檢測的問題。本發明設計的所有探針在5’端均合成一個連接氨基，并設計有一段15bp長度的多聚T連接臂，結果表明其具有較高的固定效率。本發明建立的帶標記引物的多重PCR擴增技術能夠一次性擴增出多種與對應探針互補的熒光標記DNA，保證固液相中核酸雜交的高度特異性和靈敏性。此外，采用此種標記分法，可以大大縮短檢測時間，降低芯片檢測的成本，更適合推廣到臨床應用中。

1.一種用于檢測豬瘟、豬圓環病毒病和豬繁殖與呼吸綜合征的基因芯片，其特征在于：采用如下方法制備：根據GenBank中已發表的PCV-2、PRRSVE、PRRSVA、CSFV的序列，應用DNAStar的MEGALIGN程序找出各個病毒的保守區；寡核苷酸潛在的二聚體和特異性用NCBI即美國生物技術信息中心網站，http://www.ncbi.nlm.nih.gov的BLAST程序結合PrimerPremier5.0、Oligo6.0進行鑒定；根據探針、引物設計的相關原則及利用上述軟件設計擴增目的片段的引物序列和探針序列；合成時在每個探針的5’加上1個氨基和15個T；正鏈引物用CY-3熒光標記；引物用雙蒸水稀釋為100μmol/L，-20℃保存備用；在氨基化片基上點制的60-mer寡核苷酸探針，質量等級為PAGE級；寡核苷酸探針用無菌水溶解后，再與2×上樣緩沖液，按1:1混合，使點樣終濃度調整為25μmol/L，通過晶芯?PersonalArrayerTM-16個人點樣儀將探針片段有序地點制成6行×5列的陣列，每條探針橫向重復點3個點；點制好的基因芯片通過37℃水浴放置18h以上后經洗滌、封閉、干燥后置干燥器中室溫保存；所述上樣緩沖液為pH?7.4含?0.5%?SDS的200μmol/L?PBS；其中，基因芯片引物中，PCV-2序列為，PCV-21：AGCACCTCAGCAGCAACAT，PCV-22：GGTCACTCCGTTGTCCTTGA；PRRSVE序列為：PRRSV1：ATGCTTTTCAGGACAGGTCA，PRRSV2：GCTCAGTTGATTTCTTCACCTC；PRRSVA序列為：PRRSV1：AACCAGTCCAGAGGCAAGG，PRRSV2：GGCAAACTAAACTCCACAGTGT；CS?FV序列為：CSFV1：CCTGAGAACGGCTAAGATGAC，CSFV2：TCCAACTCACCTATTCCCTTCA；基因芯片探針序列中：PRRSVA基因芯片探針序列為：TTTTTTTTTTTTTTTGTCGCTAGAGGGAAATGGGGCTTCTCCGGGTTTTTCTTCCTATTTTT；CSFV基因芯片探針序列為：TTTTTTTTTTTTTTTAACAGCGTTGCTAACCTGGACCTACATTAGTGACTATTATAGATACAAGACT；PCV-2基因芯片探針序列為：TTTTTTTTTTTTTTTAAAGCGAAAGGAACGGATCAGCAGAATAAAGAATATTGCAGTAAAGAAGGC；PRRSVE基因芯片探針序列為：TTTTTTTTTTTTTTTTTGGGAACCAGAACCTCCTTGCCTTTGACCAGATACCTATTATACGT。