磁捕獲技術在NF-κB蛋白分離與檢測中的應用。應用磁捕獲分離、檢測NF-κB蛋白的技術是先制備含NF-κB結合位點，且末端標記生物素的NF-κB探針。將生物素標記的NF-κB探針與鏈霉親和素包被的Dynabead磁珠連接，形成DNA-磁珠復合物。取該復合物與細胞總蛋白抽提物進行結合，在磁性分離器中清洗DNA-磁珠-蛋白復合物，除去未結合的細胞蛋白，洗脫捕獲的蛋白。用相應的抗體對洗脫下的蛋白進行Western印跡檢測，進而驗證該技術的有效性。該技術在分離蛋白的同時，還可以鑒定其活性，而且還能捕獲疑是互作分子的蛋白。試驗表明磁捕獲NF-κB蛋白技術是一種多功能、實用的新技術，其將有助于在蛋白水平研究NF-κB蛋白。

1.磁捕獲技術在NF-κB蛋白分離與檢測中的應用方法，其特征是包括下列操作步驟：
(1)制備細胞蛋白抽提物：
1)離心收集血淋巴細胞和粉蚊夜蛾細胞，用預冷的PBS洗1次，加入細胞裂解液4℃溶解
40分鐘，其間不斷地輕微震蕩細胞溶液；
2)4℃12000×g離心20分鐘，取上清，于-20℃儲存；
(2)生物素標記NF-κB探針的制備：
隨機選取一段100bp大小的DNA設計引物進行PCR擴增，上游引物BioF：
GCACCTCAGCAAGCACCTGCTCGCTC在其5’末端標記生物素，下游引物BioRw：
CCTGGGAAAGTCCCCTCACACTCGTAGC含有一個NF-κB結合位點，PCR產物經2％瓊脂糖
凝膠電泳，回收純化目的片段即為生物素標記的NF-κB探針；經同樣的方法，以引物BioF和
BioRm?CCTG?TTTGCTTACCCTCACACTCGTAGC合成對照探針；
(3)NF-κB標記探針與磁珠連接：
雙鏈DNA探針末端標記有生物素，能與鏈霉親和素包被的磁珠連接，取2mg
M-280磁珠，用1×B&W緩沖液洗兩遍，加入100pmol標記了的NF-κB探針，室溫結合20min，
未結合的探針通過磁分離器洗脫去除；
(4)NF-κB蛋白與DNA探針結合：
向盛有上述磁珠的微量離心管中加入300μl的結合緩沖液，棄緩沖液，加入400μl血細胞
蛋白抽提物，20μl濃度為1mg/ml的非特異競爭DNA即poly[d(I-C)]，室溫中緩慢搖動反應1h；
(5)磁場分離NF-κB蛋白：
將上述反應的微量離心管置于磁分離器中2min，用移液槍緩慢去除反應液；
(6)洗脫捕獲的NF-κB蛋白：
用300μl的結合緩沖液清洗磁珠，棄去洗液，加入40μl的洗脫液，用移液槍緩慢吹打數次，
在磁分離器中分離洗脫下的蛋白；
(7)用抗體進行Western蛋白印跡檢測洗脫的蛋白。