本發(fā)明提供了一種基于高通量基因測(cè)序無(wú)創(chuàng)檢測(cè)線粒體DNA的方法，該方法步驟如下：（1）提取口腔細(xì)胞總基因組DNA；（2）設(shè)計(jì)PCR引物及體外富積擴(kuò)增線粒體DNA：（3）高通量測(cè)序檢測(cè)。本發(fā)明的方法實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn)、實(shí)驗(yàn)流程簡(jiǎn)單，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、快速、自動(dòng)化程度高，可以不同程度滿(mǎn)足科研及臨床檢測(cè)的需求，適用于科研和臨床針對(duì)線粒體相關(guān)的突變快速檢測(cè)。

1.一種基于高通量基因測(cè)序無(wú)創(chuàng)檢測(cè)線粒體DNA的PCR引物組合，該P(yáng)CR引物組合由兩對(duì)PCR引物序列組成，用于對(duì)抽提出來(lái)的總基因組DNA進(jìn)行完整的線粒體DNA體外富積擴(kuò)增；第一對(duì)PCR引物序列為：F7065?5'-?GCCATCATAGGAGGCTTCATTCAC?-?3'，R16455?5'-?CGGAGCGAGGAGAGTAGCACTCTT?-?3'，擴(kuò)增線粒體DNA的位點(diǎn)7065/16455區(qū)域，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為9391?bps；第二對(duì)PCR引物序列為：F16394??5'?-?CCTTGACCACCATCCTCCGTGAA?-?3'，R7111?5'?-?TAGCCTGAGAATAGGGGAAATCAGT?-?3'，擴(kuò)增線粒體DNA的位點(diǎn)16394/7111，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為7287?bps；其中，所述引物配合如下反應(yīng)體系：PCR反應(yīng)體系為?50?μl總體系，具體是5×Phusion?HF?Buffer?10μl，?2.5?mM?dNTPmix?5μl，10?mM的上下游引物各2μl，2?U/μl的?Phusion?DNA聚合酶0.8μl，1-10?ng的總基因組DNA模板?1μl，用滅菌水補(bǔ)足50?μl體系；反應(yīng)條件為“降落PCR”：95℃?5?min預(yù)變性，循環(huán)內(nèi)98℃?10?s變性，從68℃每個(gè)循環(huán)降1℃退火，72℃延伸?5?min，10個(gè)循環(huán)；在62℃退火，進(jìn)行25個(gè)循環(huán)；PCR反應(yīng)循環(huán)后72℃繼續(xù)延伸?7?min，然后16℃?保存；所述線粒體DNA為人線粒體DNA。