1.一種用于制備生物汽油的工程大腸桿菌,通過下述方法得到
通過聚合酶鏈式反應擴增乙酰-CoA羧化酶基因、硫脂酶基因、脂酰
-CoA還原酶基因和脂肪醛脫羧酶基因,用膠回收試劑盒回收目的片段,
然后分別雙酶切目的片段和原核表達載體pET-30a(+)或pACYCDuet-1,載
體片斷膠回收后,將載體:基因片段按摩爾比為1-2∶4-5的比例混合,加入
T4DNA連接酶后4-7℃連接15-30小時,連接產物38-42℃熱擊轉化E.coli?
DH5α感受態細胞,涂布平板培養過夜,PCR篩選陽性克??;陽性克隆提
取質粒DNA,酶切和測序鑒定后,熱擊轉化E.coli?BL21(DE3),最后敲除
該工程大腸桿菌的fadE基因后即得目標工程大腸桿菌。
2.一種利用權利要求1所述工程大腸桿菌制備生物汽油的方法,將
構建好的工程大腸桿菌以1∶100的體積比例接種內含卡那霉素和氯霉素的
M9液體培養液中,37℃,225rpm條件下培養至OD600nm為0.6-0.8時,加
入誘導劑IPTG至終濃度為0.1mmol·L-1,誘導目的蛋白的過量表達,然
后轉入30℃,225rpm繼續培養18-24小時;培養后的菌液離心取上清液,
用等體積的正己烷萃取,減壓蒸發除去正己烷后制得生物汽油。
3.根據權利要求2所述制備生物汽油的方法,其中,正己烷經過減壓
蒸餾后回收使用。
4.根據權利要求2所述的制備生物汽油的方法,其中,所得生物汽油
通過GC-MS分析其組成及含量。
展開