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一種用于制備生物汽油的工程大腸桿菌

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-09-27
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN200910090470.0 
  • 技術(專利)名稱 一種用于制備生物汽油的工程大腸桿菌 
  • 項目單位 青島生物能源與過程研究所
  • 發明人 咸漠,楊建明,鄭艷寧,劉煒,徐鑫 
  • 行業類別 中藥材獲取-動植物采集
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 尤鳳英
  • 發布時間 2021-09-27  
  • 01

    項目簡介

    一種用于制備中碳脂肪醇的工程大腸桿菌和制備中碳脂肪醇的方法,該方法通過在大腸桿菌中過量表達硫脂酶基因,脂酰-CoA還原酶基因和脂肪醛脫羧酶基因等,使大腸桿菌獲得生產生物汽油的能力,結合過量表達乙酰-CoA羧化酶基因并敲除大腸桿菌的脂酰-CoA脫氫酶基因,進一步提高工程大腸桿菌的生物汽油的生產能力。該方法可用于新一代要生物汽油的的生產。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種用于制備生物汽油的工程大腸桿菌,通過下述方法得到
    通過聚合酶鏈式反應擴增乙酰-CoA羧化酶基因、硫脂酶基因、脂酰
    -CoA還原酶基因和脂肪醛脫羧酶基因,用膠回收試劑盒回收目的片段,
    然后分別雙酶切目的片段和原核表達載體pET-30a(+)或pACYCDuet-1,載
    體片斷膠回收后,將載體:基因片段按摩爾比為1-2∶4-5的比例混合,加入
    T4DNA連接酶后4-7℃連接15-30小時,連接產物38-42℃熱擊轉化E.coli?
    DH5α感受態細胞,涂布平板培養過夜,PCR篩選陽性克??;陽性克隆提
    取質粒DNA,酶切和測序鑒定后,熱擊轉化E.coli?BL21(DE3),最后敲除
    該工程大腸桿菌的fadE基因后即得目標工程大腸桿菌。
    2.一種利用權利要求1所述工程大腸桿菌制備生物汽油的方法,將
    構建好的工程大腸桿菌以1∶100的體積比例接種內含卡那霉素和氯霉素的
    M9液體培養液中,37℃,225rpm條件下培養至OD600nm為0.6-0.8時,加
    入誘導劑IPTG至終濃度為0.1mmol·L-1,誘導目的蛋白的過量表達,然
    后轉入30℃,225rpm繼續培養18-24小時;培養后的菌液離心取上清液,
    用等體積的正己烷萃取,減壓蒸發除去正己烷后制得生物汽油。
    3.根據權利要求2所述制備生物汽油的方法,其中,正己烷經過減壓
    蒸餾后回收使用。
    4.根據權利要求2所述的制備生物汽油的方法,其中,所得生物汽油
    通過GC-MS分析其組成及含量。
    展開

專利技術附圖

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