一種用于制備中碳脂肪醇的工程大腸桿菌和制備中碳脂肪醇的方法，該方法通過在大腸桿菌中過量表達硫脂酶基因，脂酰-CoA還原酶基因和脂肪醛脫羧酶基因等，使大腸桿菌獲得生產生物汽油的能力，結合過量表達乙酰-CoA羧化酶基因并敲除大腸桿菌的脂酰-CoA脫氫酶基因，進一步提高工程大腸桿菌的生物汽油的生產能力。該方法可用于新一代要生物汽油的的生產。

1.一種用于制備生物汽油的工程大腸桿菌，通過下述方法得到
通過聚合酶鏈式反應擴增乙酰-CoA羧化酶基因、硫脂酶基因、脂酰
-CoA還原酶基因和脂肪醛脫羧酶基因，用膠回收試劑盒回收目的片段，
然后分別雙酶切目的片段和原核表達載體pET-30a(+)或pACYCDuet-1，載
體片斷膠回收后，將載體：基因片段按摩爾比為1-2∶4-5的比例混合，加入
T4DNA連接酶后4-7℃連接15-30小時，連接產物38-42℃熱擊轉化E.coli?
DH5α感受態細胞，涂布平板培養過夜，PCR篩選陽性克??；陽性克隆提
取質粒DNA，酶切和測序鑒定后，熱擊轉化E.coli?BL21(DE3)，最后敲除
該工程大腸桿菌的fadE基因后即得目標工程大腸桿菌。
2.一種利用權利要求1所述工程大腸桿菌制備生物汽油的方法，將
構建好的工程大腸桿菌以1∶100的體積比例接種內含卡那霉素和氯霉素的
M9液體培養液中，37℃，225rpm條件下培養至OD_600nm為0.6-0.8時，加
入誘導劑IPTG至終濃度為0.1mmol·L^-1，誘導目的蛋白的過量表達，然
后轉入30℃，225rpm繼續培養18-24小時；培養后的菌液離心取上清液，
用等體積的正己烷萃取，減壓蒸發除去正己烷后制得生物汽油。
3.根據權利要求2所述制備生物汽油的方法，其中，正己烷經過減壓
蒸餾后回收使用。
4.根據權利要求2所述的制備生物汽油的方法，其中，所得生物汽油
通過GC-MS分析其組成及含量。