一步層析法從大腸桿菌中純化Exendin-4的工藝，它是按下述步驟進行的：(1)菌體裂解、(2)重組Exendin-4吸附、(3)雜蛋白漂洗、(4)樹脂平衡、(5)融合端切除及Exendin-4收集、(6)Exendin-4純度及活性鑒定。由于本發明對蛋白質純化步驟進行了革新，對相應的裂解液、洗液及平衡液的配方和用量進行了改進，省去了洗脫、透析及再次層析等步驟，增加了目的蛋白的產量和純度。本發明和現有技術相比，簡化了操作程序，操作步驟簡便易行，適合工業化大批生產。

1.一步層析法從大腸桿菌中純化Exendin-4的工藝，其特征在于它是按
下述步驟進行的：
(1)菌體裂解：將-20℃保存的含重組Exendin-4的細菌于冰上融化后，
每克細菌用10ml裂解緩沖液懸浮沉淀，冰浴30min，超聲波破碎；
(2)重組Exendin-4吸附：將上述裂解緩沖液于4℃，8000rpm離心30min；
將上清液與鎳樹脂按2∶1體積混合，4℃緩慢振蕩吸附3h；4℃，3000rpm離心
5min，棄去上清；
(3)雜蛋白漂洗：在上述鎳樹脂中加入4.0倍于裂解緩沖液的漂洗緩沖液，
4℃緩慢振蕩5min，3000rpm離心5min，棄上清；
(4)樹脂平衡：在上述鎳樹脂中加入2.5倍于裂解緩沖液的平衡緩沖液，
4℃緩慢振蕩20min；4℃，3000rpm離心5min，棄上清；再重復一次；
(5)融合端切除及Exendin-4收集：用與裂解緩沖液等體積的平衡緩沖
液懸浮樹脂，加入10U腸激酶，4℃緩慢搖動消化6h；靜置30min后，3000rpm
離心5min，上清液即純化的Exendin-4溶液；
(6)Exendin-4純度及活性鑒定：利用Ticin-SDS-PAGE鑒定Exendin-4的
純度，用糖尿病小鼠鑒定Exendin-4的生物活性；
所述步驟(1)中所用裂解緩沖液的組成為：50mM?NaH₂PO₄、300mM?NaCl、
10mM咪唑，用NaOH調pH至8.0；現用現加：Trition?100，0.01％；甘油，2
％；β-巰基乙醇，10mM；PMSF，0.1％；1mM?MgCl₂；1mM?MnCl₂，；Rnase
1U；Dnase?1U；
所述步驟(3)中所用的漂洗緩沖液組成為：50mM?NaH₂PO₄、300mM?NaCl、
20mM咪唑，用NaOH調pH至8.0；現用現加：甘油，2％；β-巰基乙醇，10mM；
所述步驟(4)和步驟(5)中所用的平衡緩沖液的組成為50mM?Tris-HCl；
1mM?CaCl₂；0.1％Tween?20，pH8.0。