1.通過在適當的培養基中培養大腸桿菌菌株的微生物而發酵產生乙醇
酸,并從培養基回收乙醇酸的方法,所述培養基包含能被所述微生物代謝的
碳源,所述方法包括如下步驟:
a)通過轉化所述碳源來發酵所述微生物以產生乙醇酸,
b)濃縮所述微生物或培養基中的乙醇酸,和
c)從任選地以部分或全部量保留在終產物中的生物質和/或發酵液中分
離乙醇酸,
其中所述微生物包含至少一個編碼NADPH依賴性乙醛酸還原酶的基因,
所述至少一個編碼NADPH依賴性乙醛酸還原酶的基因是ycdW,而且其中通
過缺失下述與乙醛酸代謝相關的基因而修飾所述微生物以削弱從乙醛酸到除
乙醇酸以外的其它產物的轉化:
●編碼蘋果酸合成酶的aceB
●編碼第二個蘋果酸合成酶的glcB,和
●編碼乙醛酸醛連接酶的gcl。
2.權利要求1中要求的方法,其中通過聚合成至少乙醇酸二聚物的步驟
分離乙醇酸。
3.權利要求2中要求的方法,其中通過從乙醇酸二聚物、寡聚物和/或多
聚物解聚合而回收乙醇酸。
4.權利要求1中要求的方法,其中所述編碼NADPH依賴性乙醛酸還原
酶的基因是內源的。
5.權利要求1中要求的方法,其中所述編碼NADPH依賴性乙醛酸還原
酶的基因的表達增加。
6.權利要求1中要求的方法,其中所述微生物通過削弱選自下述與乙醇
酸代謝相關的基因的至少一個基因在所述微生物中的表達而被修飾使得其不
能代謝乙醇酸:
●編碼乙醇酸氧化酶的glcDEF
●編碼乙醇醛脫氫酶的aldA。
7.權利要求1中要求的方法,其中所述微生物經過轉化通過削弱異檸檬
酸脫氫酶的活性以增加乙醛酸途徑的通量。
8.權利要求1中要求的方法,其中所述微生物經過轉化通過削弱下述基
因中至少一個基因在所述微生物中的表達以增加乙醛酸途徑的通量:
●編碼磷酸轉乙酰酶的pta
●編碼乙酸激酶的ack
●編碼丙酮酸氧化酶的poxB。
9.權利要求1中要求的方法,其中所述微生物經過轉化通過增加aceA
的活性來增加乙醛酸途徑中的通量。
10.權利要求9中要求的方法,其中通過削弱基因iclR或fadR的表達來
增加aceA的表達。
11.權利要求9中要求的方法,其中通過在基因aceA的上游引入人工啟
動子來增加aceA的表達。
12.權利要求1中要求的方法,其中通過削弱選自下述的基因中的至少一
個基因在所述微生物中的表達而增加了NADPH的可用性:
●編碼6-磷酸葡萄糖異構酶的pgi
●編碼可溶轉氫酶的udhA
●編碼磷酸葡糖酸脫水酶的edd。
13.權利要求1中要求的方法,其中所述碳源是下述中的至少一種:葡
萄糖或蔗糖。
14.權利要求1中要求的方法,其中所述碳源是下述中的至少一種:單
糖、寡糖、淀粉或甘油。
15.一種大腸桿菌菌株,其通過缺失下述與乙醛酸代謝相關的基因而被
修飾以削弱從乙醛酸到除乙醇酸以外的其它產物的轉化:
●編碼蘋果酸合成酶的aceB
●編碼第二個蘋果酸合成酶的glcB,和
●編碼乙醛酸醛連接酶的gcl
且其中所述大腸桿菌菌株包含至少一個編碼NADPH依賴性乙醛酸還原
酶的基因,所述至少一個編碼NADPH依賴性乙醛酸還原酶的基因是ycdW。
16.權利要求15的大腸桿菌菌株,其中所述編碼NADPH依賴性乙醛酸
還原酶的基因是內源的。
17.權利要求15的大腸桿菌菌株,其中所述編碼NADPH依賴性乙醛酸
還原酶的基因的表達增加。
18.權利要求15的大腸桿菌菌株,其中所述大腸桿菌菌株通過削弱選自
下述與乙醇酸代謝相關的基因的至少一個基因在所述大腸桿菌菌株中的表
達而被修飾使得其不能代謝乙醇酸:
●編碼乙醇酸氧化酶的glcDEF
●編碼乙醇醛脫氫酶的aldA。
19.權利要求15的大腸桿菌菌株,其中所述大腸桿菌菌株經過轉化通過
削弱異檸檬酸脫氫酶的活性以增加乙醛酸途徑的通量。
20.權利要求19的大腸桿菌菌株,其中所述大腸桿菌菌株經過轉化通過
削弱下述基因中至少一個基因在所述大腸桿菌菌株中的表達以增加乙醛酸途
徑的通量:
●編碼磷酸轉乙酰酶的pta
●編碼乙酸激酶的ack
●編碼丙酮酸氧化酶的poxB。
21.權利要求15的大腸桿菌菌株,其中所述大腸桿菌菌株經過轉化通過
增加aceA的活性來增加乙醛酸途徑中的通量。
22.權利要求21的大腸桿菌菌株,其中通過削弱基因iclR或fadR的表
達來增加aceA的表達。
23.權利要求21的大腸桿菌菌株,其中通過在基因aceA的上游引入人
工啟動子來增加aceA的表達。
24.權利要求15的大腸桿菌菌株,其中通過削弱選自下述的基因中的至少
一個基因在所述大腸桿菌菌株中的表達而增加了NADPH的可用性:
●編碼6-磷酸葡萄糖異構酶的pgi
●編碼可溶轉氫酶的udhA
●編碼磷酸葡糖酸脫水酶的edd。
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