本發(fā)明公開了鴨瘟病毒gE基因轉(zhuǎn)移載體pUC-ΔgE-EGFP，包含轉(zhuǎn)移載體pUC-ΔgE-EGFP的大腸桿菌種(Escherichia coli)JM109于2012年2月24日保藏于位于中國武漢大學(xué)的中國典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏編號(hào)為CCTCC NO：M2012033；分類命名為大腸桿菌JM109/pUC-ΔgE-EGFP(Escherichia coli JM109/pUC-ΔgE-EGFP)。該轉(zhuǎn)移載體可通過與鴨瘟病毒同源重組，獲得EGFP標(biāo)記基因的重組鴨瘟病毒，鴨瘟病毒gE缺失重組株DPV-ΔgE-EGFP，于2012年2月23日保藏于位于中國武漢大學(xué)的中國典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏編號(hào)為CCTCC NO：V201210。該重組病毒將可以發(fā)展成為具有篩選標(biāo)記的有效預(yù)防鴨瘟的新型疫苗。

1.一種鴨瘟病毒gE基因轉(zhuǎn)移載體pUC-ΔgE-EGFP，包含轉(zhuǎn)移載體pUC-ΔgE-EGFP的大腸桿菌種(Escherichia?coli)JM109于2012年2月24日保藏于位于中國武漢大學(xué)的中國典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏編號(hào)為CCTCC?NO：M2012033；分類命名為大腸桿菌JM109/pUC-ΔgE-EGFP(Escherichia?coli?JM109/pUC-ΔgE-EGFP)。?2.權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)移載體pUC-ΔgE-EGFP的制備方法，其特征在于包括以下步驟：?1)以鴨瘟病毒CHv株為材料，利用PCR擴(kuò)增部分gE基因及其左側(cè)翼1073bp片段，克隆進(jìn)載體pMD18-T，構(gòu)建質(zhì)粒pMD-L，利用PCR擴(kuò)增部分gE基因及其右側(cè)翼1130bp片段，克隆進(jìn)載體pMD18-T，構(gòu)建質(zhì)粒pMD-R；鴨瘟病毒CHv株保藏編號(hào)為：CCTCC?NO：V201209；?2)先將pMD-L用Hind?III和BamH?I酶切，回收1073bp片段，克隆進(jìn)已用相應(yīng)限制性內(nèi)切酶酶切的pUC18載體，得到PUC-L載體，然后再將pMD-R中的部分gE基因及其右側(cè)翼1130bp片段以BamH?I和EcoR?I插入到已含有部分gE基因及其左側(cè)翼的pUC-L載體中，獲得載體pUC-ΔgE；?3)用ApaL?I和Mlu?I酶切質(zhì)粒pEGFP-C1，回收包含CMV立即早期啟動(dòng)子、EGFP基因、轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)SV40polyA以及一個(gè)多克隆位點(diǎn)基因共2016bp片段的EGFP表達(dá)盒，然后對(duì)其進(jìn)行補(bǔ)平；?4)先將載體pUC-ΔgE，用BamH?I酶切后，進(jìn)行補(bǔ)平，再將其與3)中獲得補(bǔ)平后的EGFP表達(dá)盒連接，從而獲得轉(zhuǎn)移載體pUC-ΔgE-EGFP；?上述擴(kuò)增PCR擴(kuò)增部分gE基因及其左側(cè)翼1073bp片段的上、下游引物分別是：?上游引物：5′-AAGCTTCCTGAAAGATGTTCTAAG-3′?下游引物：5′-GGATCCTTGATGATAGTCTGCTATAC-3′?上述擴(kuò)增PCR擴(kuò)增部分gE基因及其右側(cè)翼1130bp片段的上、下游引物分別是：?上游引物：5′-GGATCCGTTTGTAGTCGGTCTCGG-3′?下游引物：5′-GAATTCCGTATTAACCTTTTGTAGCT-3′。?3.鴨瘟病毒gE缺失重組株DPV-ΔgE-EGFP，于2012年2月23日保藏于位于中國武漢大學(xué)的中國典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏編號(hào)為CCTCC?NO：V201210。?4.權(quán)利要求3所述鴨瘟病毒gE缺失重組株DPV-ΔgE-EGFP的制備方法，其特征在于，由以下步驟完成：?1)鴨瘟病毒CHv株感染鴨胚成纖維細(xì)胞；鴨瘟病毒CHv株保藏編號(hào)為：CCTCC?NO：V201209；?2)轉(zhuǎn)移載體pUC-ΔgE-EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染；權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)移載體pUC-ΔgE-EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染鴨瘟病毒CHv株感染鴨胚成纖維細(xì)胞；?3)收獲出現(xiàn)熒光斑的細(xì)胞；?4)結(jié)合無限稀釋法，通過空斑純化獲得重組鴨瘟病毒。?