1.一種野豬α-干擾素的基因合成和載體構建及產物的生產方法，其組成包括：用大腸桿菌偏愛密碼子以及密碼子對合成了
野豬α-干擾素基因，構建高效表達載體并轉化高效表達菌株，工程菌高密度發酵、包涵體的分離純化、目的蛋白的變性、復性和純化以及表達產物的生物活
性測定方法，其特征是：所述的人工合成的編碼野豬α-干擾素的基因含有如下核苷酸序列ATG?TGT?GATCTG?CCG?CAA?ACC?CAT?AGC?CTG?GCG?CAC?ACC?CGT
?GCG?CTG?CGT?CTG?CTG?GCG?CAGATG?CGT?CGC?ATC?AGC?CCG?TTT?AGC?TGC?CTG?GAT?CAC?CGT?CGC?GAT?TTT?GGT?TTCCCG?CAG?GAA?GCG?CTG?GGC?GGC?
AAC?CAG?GTG?CAG?AAA?GCG?CAA?GCC?ATG?GCG?CTGGTG?CAT?GAG?ATG?CTG?CAG?CAG?ACC?TTC?CAG?CTG?TTC?AGC?ACC?GAA?GGC?AGC?GCGGCG?GCC?TGG?
GAT?GAG?AGC?CTG?CTG?CAC?CAG?TTC?TAT?ACC?GGT?CTG?GAT?CAG?CAGCTG?CGC?GAT?CTG?GAA?GCG?TGC?GTG?ATG?CAG?GAG?GCG?GGC?CTG?GAA?GGC?ACC
?CCGCTG?CTG?GAG?GAG?GAT?AGC?ATT?CTG?GCG?GTG?CGT?AAA?TAT?TTC?CAT?CGT?CTG?ACGCTG?TAT?CTG?CAA?GAA?AAA?AGC?TAC?AGC?CCG?TGT?GCG?TGG
?GAA?ATT?GTG?CGT?GCGGAA?GTG?ATG?CGC?GCG?TTC?AGC?AGC?AGC?ACC?AAC?CTG?CAA?GAT?CGT?CTG?CGT?AAAAAA?GAA?TAA，將含有所述的核苷酸序列的
野豬α-干擾素的基因插入到帶有pL、pR啟動子、Cits溫控阻遏蛋白基因的表達載體pWL中，構建成野豬α-干擾素的基因的表達質粒pWL-poIFN-α，轉化大
腸桿菌DH-5α后，野豬α-干擾素獲得高效表達，對所述的工程菌進行30℃培養過夜，以10％接種量接種至發酵罐中，誘導表達時機為OD600達到4～10時，42℃誘導發酵培養2.5～5.5小時，包涵體粗提液為50毫摩tris、1毫摩乙二胺四乙酸、0.1毫克/毫升溶菌酶、0.1～0.4％TritonX-100，包涵體精提液為50毫摩tris、1毫摩乙二胺四乙酸、0.5～2摩爾脲，蛋白變性液為8～10摩爾脲、50毫摩tris、1毫摩乙二胺四乙酸、10毫摩二硫蘇糖醇，蛋白復性液為50毫摩tris、1毫摩乙二胺四乙酸、5毫摩還原型谷胱甘肽、1毫摩氧化型谷胱甘肽、10毫摩NaCl，分離純化采用Sephacry?S-200和DEAE-Sepharose?FF層析柱純化，所述的核苷酸序列的5′端ATG?TGT?GAT?CTG?CCG?CAA?ACC?CAT?AGC?CTG?GCG以及3′端CTG?CAA?GAT?CGTCTG?CGT?AAA?AAA?GAA?TAA為經過自由能和mRNA二級結構優化的序列。2.根據權利要求1所述的野豬α-干擾素的基因合成和載體構建及產物的生產方法，其特征是：所述的野豬α-干擾素的表達載體轉化為大腸桿菌DH-5α，表達蛋白占菌體總蛋白的25％～33％。3.根據權利要求1或2所述的野豬α-干擾素的基因合成和載體構建及產物的生產方法，其特征是：生產的重組野豬α-干擾素分子量為19kD，且在體外有效保護Wish細胞和胎豬體細胞免受水泡性口炎病毒的攻擊。
展開
