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野豬α-干擾素的基因合成和載體構建及產物的生產方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-09-21
  • 技術成熟度:詳情咨詢
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN200710144345.4 
  • 技術(專利)名稱 野豬α-干擾素的基因合成和載體構建及產物的生產方法 
  • 項目單位 黑龍江省農業科學院畜牧研究中心
  • 發明人 劉娣,王君偉,李文輝 
  • 行業類別 中藥材獲取-動植物采集
  • 技術成熟度 詳情咨詢
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 鄭倩清
  • 發布時間 2021-09-21  
  • 01

    項目簡介

    野豬α-干擾素的基因合成和載體構建及產物的生產方法,國內重組菌株或者是表達量不高,或者是產物是以融合狀態表達,或者是產物帶有純化標簽,或者是沒有高密度發酵工藝,存在諸多問題。本發明組成包括:用大腸桿菌偏愛密碼子以及密碼子對合成了野豬α-干擾素基因,構建高效表達載體并轉化高效表達菌株,工程菌高密度發酵、包涵體的分離純化、目的蛋白的變性、復性和純化以及表達產物的生物活性測定方法。本發明屬于生物制藥中的基因工程生產多肽藥物技術領域。
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  • 02

    說明書

    1.一種野豬α-干擾素的基因合成和載體構建及產物的生產方法,其組成包括:用大腸桿菌偏愛密碼子以及密碼子對合成了
    野豬α-干擾素基因,構建高效表達載體并轉化高效表達菌株,工程菌高密度發酵、包涵體的分離純化、目的蛋白的變性、復性和純化以及表達產物的生物活
    性測定方法,其特征是:所述的人工合成的編碼野豬α-干擾素的基因含有如下核苷酸序列ATG?TGT?GATCTG?CCG?CAA?ACC?CAT?AGC?CTG?GCG?CAC?ACC?CGT
    ?GCG?CTG?CGT?CTG?CTG?GCG?CAGATG?CGT?CGC?ATC?AGC?CCG?TTT?AGC?TGC?CTG?GAT?CAC?CGT?CGC?GAT?TTT?GGT?TTCCCG?CAG?GAA?GCG?CTG?GGC?GGC?
    AAC?CAG?GTG?CAG?AAA?GCG?CAA?GCC?ATG?GCG?CTGGTG?CAT?GAG?ATG?CTG?CAG?CAG?ACC?TTC?CAG?CTG?TTC?AGC?ACC?GAA?GGC?AGC?GCGGCG?GCC?TGG?
    GAT?GAG?AGC?CTG?CTG?CAC?CAG?TTC?TAT?ACC?GGT?CTG?GAT?CAG?CAGCTG?CGC?GAT?CTG?GAA?GCG?TGC?GTG?ATG?CAG?GAG?GCG?GGC?CTG?GAA?GGC?ACC
    ?CCGCTG?CTG?GAG?GAG?GAT?AGC?ATT?CTG?GCG?GTG?CGT?AAA?TAT?TTC?CAT?CGT?CTG?ACGCTG?TAT?CTG?CAA?GAA?AAA?AGC?TAC?AGC?CCG?TGT?GCG?TGG
    ?GAA?ATT?GTG?CGT?GCGGAA?GTG?ATG?CGC?GCG?TTC?AGC?AGC?AGC?ACC?AAC?CTG?CAA?GAT?CGT?CTG?CGT?AAAAAA?GAA?TAA,將含有所述的核苷酸序列的
    野豬α-干擾素的基因插入到帶有pL、pR啟動子、Cits溫控阻遏蛋白基因的表達載體pWL中,構建成野豬α-干擾素的基因的表達質粒pWL-poIFN-α,轉化大
    腸桿菌DH-5α后,野豬α-干擾素獲得高效表達,對所述的工程菌進行30℃培養過夜,以10%接種量接種至發酵罐中,誘導表達時機為OD600達到4~10時,42℃誘導發酵培養2.5~5.5小時,包涵體粗提液為50毫摩tris、1毫摩乙二胺四乙酸、0.1毫克/毫升溶菌酶、0.1~0.4%TritonX-100,包涵體精提液為50毫摩tris、1毫摩乙二胺四乙酸、0.5~2摩爾脲,蛋白變性液為8~10摩爾脲、50毫摩tris、1毫摩乙二胺四乙酸、10毫摩二硫蘇糖醇,蛋白復性液為50毫摩tris、1毫摩乙二胺四乙酸、5毫摩還原型谷胱甘肽、1毫摩氧化型谷胱甘肽、10毫摩NaCl,分離純化采用Sephacry?S-200和DEAE-Sepharose?FF層析柱純化,所述的核苷酸序列的5′端ATG?TGT?GAT?CTG?CCG?CAA?ACC?CAT?AGC?CTG?GCG以及3′端CTG?CAA?GAT?CGTCTG?CGT?AAA?AAA?GAA?TAA為經過自由能和mRNA二級結構優化的序列。2.根據權利要求1所述的野豬α-干擾素的基因合成和載體構建及產物的生產方法,其特征是:所述的野豬α-干擾素的表達載體轉化為大腸桿菌DH-5α,表達蛋白占菌體總蛋白的25%~33%。3.根據權利要求1或2所述的野豬α-干擾素的基因合成和載體構建及產物的生產方法,其特征是:生產的重組野豬α-干擾素分子量為19kD,且在體外有效保護Wish細胞和胎豬體細胞免受水泡性口炎病毒的攻擊。
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專利技術附圖

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