本發(fā)明涉及微生物能力驗(yàn)證技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種微生物能力驗(yàn)證沙門氏菌樣品的制備方法，以沙門氏菌為目標(biāo)菌，以粘質(zhì)沙雷氏菌、弗氏檸檬酸桿菌、大腸桿菌為干擾菌，包括：(A)、菌株的復(fù)蘇、增菌；(B)、菌株的分離；(C)、菌懸液的制備；(D)、冷凍干燥和包裝。最后制備的樣品包括：簡單級陰性樣品，簡單級陽性樣品；中級陰性樣品，中級陽性樣品；困難級陰性樣品，困難級陽性樣品。同一等級的樣品配對使用。本發(fā)明方法制備的樣品穩(wěn)定性好，菌種存活率高，且具有合理的不同難度等級標(biāo)準(zhǔn)。

1.微生物能力驗(yàn)證沙門氏菌樣品的制備方法，以沙門氏菌為目標(biāo)菌，以粘質(zhì)沙雷氏菌、
弗氏檸檬酸桿菌、大腸桿菌為干擾菌，其特征在于包括如下步驟：
(A)、菌株的復(fù)蘇、增菌：將目標(biāo)菌的標(biāo)準(zhǔn)菌和各干擾菌的標(biāo)準(zhǔn)菌分別加入到營養(yǎng)肉湯
或營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基中，在36±1℃下使所述各標(biāo)準(zhǔn)菌復(fù)蘇、生長和增菌，培養(yǎng)期間并對
各菌株進(jìn)行菌種鑒定；其中各菌株的培養(yǎng)基中添加有海藻糖，所述海藻糖在培養(yǎng)基中的含
量為2-4g/mL；
(B)、菌株的分離：當(dāng)上述培養(yǎng)的沙門氏菌培養(yǎng)至穩(wěn)定期時對其培養(yǎng)基進(jìn)行離心分離，
得到沙門氏菌菌泥；當(dāng)每一種干擾菌培養(yǎng)至對數(shù)生長期后，對其培養(yǎng)基進(jìn)行離心分離，得到
各干擾菌菌泥，其中對培養(yǎng)有菌株的各個培養(yǎng)基進(jìn)行分離前，將所述培養(yǎng)基放置于45-50℃
的環(huán)境中1-2h；
(C)、菌懸液的制備：
簡單級陰性樣品菌懸液的制備：將1份大腸桿菌菌泥添加到濃度為8-12wt％的脫脂牛
乳水溶液中，控制菌懸液的濃度為(3-7)×10⁴cfu/mL，攪拌均勻后得到簡單級陰性樣品菌
懸液；
簡單級陽性樣品菌懸液的制備：將1份沙門氏菌菌泥和1份大腸桿菌菌泥添加到濃度為
8-12wt％的脫脂牛乳水溶液中，控制菌懸液中目標(biāo)菌的濃度為(3-7)×10²cfu/mL，干擾菌
的濃度為(3-7)×10⁴cfu/mL，攪拌均勻后得到簡單級陽性樣品菌懸液；
中級陰性樣品菌懸液的制備：將1份大腸桿菌菌泥和1份弗氏檸檬酸桿菌菌泥添加到濃
度為8-12wt％的脫脂牛乳水溶液中，各干擾菌的濃度為(3-7)×10⁴cfu/mL，攪拌均勻后得
到中級陰性樣品菌懸液；
中級陽性樣品菌懸液的制備：將1份沙門氏菌菌泥、1份大腸桿菌菌泥和1份弗氏檸檬酸
桿菌菌泥添加到濃度為8-12wt％的脫脂牛乳水溶液中，控制菌懸液中目標(biāo)菌的濃度為(3-
7)×10²cfu/mL，各干擾菌的濃度為(3-7)×10⁴cfu/mL，攪拌均勻后得到中級陽性樣品菌懸
液；
困難級陰性樣品菌懸液的制備：將1份大腸桿菌菌泥、1份粘質(zhì)沙雷氏菌菌泥和1份弗氏
檸檬酸桿菌菌泥添加到濃度為8-12wt％的脫脂牛乳水溶液中，各干擾菌的濃度為(3-7)×
10⁴cfu/mL，攪拌均勻后得到困難級陰性樣品菌懸液；
困難級陽性樣品菌懸液的制備：將1份沙門氏菌菌泥、1份大腸桿菌菌泥、1份粘質(zhì)沙雷
氏菌菌泥和1份弗氏檸檬酸桿菌菌泥添加到濃度為8-12wt％的脫脂牛乳水溶液中，控制菌
懸液中目標(biāo)菌的濃度為(3-7)×10²cfu/mL，各干擾菌的濃度為(3-7)×10⁴cfu/mL，攪拌均勻
后得到困難級陽性樣品菌懸液；
在配制各菌懸液時，所述脫脂牛乳水溶液中還添加有殼聚糖和聚乙烯醇中的一種或兩
種；所述殼聚糖或聚乙烯醇在所述脫脂牛乳水溶液中的濃度均為0.2-0.5wt％；上述份數(shù)均
為重量份數(shù)；
(D)、冷凍干燥和包裝：分別稱取上述制備的每種菌懸液1mL，并分別添加到各自的安瓶
中，將所述安瓶平開蓋放入冷凍干燥機(jī)中，在-22℃至-18℃溫度下預(yù)先凍結(jié)7-9h，接著轉(zhuǎn)移
到溫度為-50℃至-40℃的冷凍干燥機(jī)中，抽真空并使真空度達(dá)到100μmHg以上，然后將安瓶
均勻放置于冷凍室內(nèi)的隔板上，升華干燥45-55h；待安瓶內(nèi)物質(zhì)呈乳白色疏松海綿狀時，對
安瓶繼續(xù)進(jìn)行解析干燥1.5-2.5h；結(jié)束后對安瓶進(jìn)行封口、壓蓋、貼簽，制得微生物能力驗(yàn)
證沙門氏菌樣品，將所述樣品貯存于4℃的環(huán)境中。
2.如權(quán)利要求1所述的微生物能力驗(yàn)證沙門氏菌樣品的制備方法，其特征在于，所述聚
乙烯醇的相對分子量為16000-20000。
3.如權(quán)利要求1所述的微生物能力驗(yàn)證沙門氏菌樣品的制備方法，其特征在于，在所述
步驟(D)中對所述安瓶進(jìn)行封口和壓蓋時在冷凍干燥機(jī)的干燥箱內(nèi)操作，且封口后安瓶內(nèi)
為真空狀態(tài)。
4.如權(quán)利要求1所述的微生物能力驗(yàn)證沙門氏菌樣品的制備方法，其特征在于，在所述
步驟(A)中對各標(biāo)準(zhǔn)菌進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng)時，用接種環(huán)挑取一環(huán)菌株，并將其接種到10mL的培養(yǎng)
基中。
5.如權(quán)利要求1所述的微生物能力驗(yàn)證沙門氏菌樣品的制備方法，其特征在于，在所述
步驟(C)中配制各菌懸液時，所述脫脂牛乳水溶液的濃度為10wt％，菌懸液中目標(biāo)菌的濃度
為5×10²cfu/mL，各干擾菌的濃度為5×10⁴cfu/mL。
6.如權(quán)利要求1所述的微生物能力驗(yàn)證沙門氏菌樣品的制備方法，其特征在于，在所述
步驟(D)中，安瓶在的預(yù)先凍結(jié)溫度為-20℃，預(yù)先凍結(jié)8h；接著轉(zhuǎn)移到的冷凍干燥機(jī)的溫度
為-45℃；對安瓶的升華干燥時間為50h；對安瓶的解析干燥時間為2h。