本發(fā)明提供了一種重組豬IFNγ-Fc融合蛋白及其編碼基因、表達(dá)、純化和包涵體復(fù)性方法，屬于生物基因工程領(lǐng)域。IFNγ是由T細(xì)胞及NK細(xì)胞合成，具有廣譜抗病毒功能和免疫調(diào)節(jié)的作用，對疾病的發(fā)生發(fā)展有著重要的影響。天然的豬IFNγ在機(jī)體內(nèi)表達(dá)不足以供臨床大量研究及應(yīng)用，并存在在血漿中清除速度較快的缺陷。本發(fā)明提供了一種適于大腸桿菌原核表達(dá)體系的重組豬IFNγ-Fc融合蛋白。其中，豬IFNγ部分為豬IFNγ胞外區(qū)的全部序列，F(xiàn)c片段部分包括抗體的鉸鏈區(qū)、CH2區(qū)和CH3區(qū)，二者之間為直接融合。本發(fā)明的融合蛋白，不僅具有高于原蛋白IFNγ的生物活性，而且極大的延長了其半衰期，為其產(chǎn)業(yè)化發(fā)展提供了機(jī)遇。

1.一種重組豬干擾素γ-Fc融合蛋白制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)挑取一個或多個含有SEQ?ID?NO：1所示的基因的大腸桿菌菌落，接入含抗生素的
LB培養(yǎng)液，培養(yǎng)過夜；
(2)取過夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接入于含抗生素的新鮮LB培養(yǎng)液中，于37℃震蕩培養(yǎng)至對數(shù)中期
OD₆₀₀＝1.0；
(3)在培養(yǎng)物中加入濃度為1mmol/L的IPTG，誘導(dǎo)表達(dá)4h后，離心處理收集含有重組豬
干擾素γ-Fc融合蛋白的大腸桿菌菌體沉淀；
(3)將收集得到的大腸桿菌沉淀，PBS重懸，并于4℃高速離心處理，重復(fù)一次；
(4)吸去上清，稱菌體沉淀重量，菌體重量以濕重計每克加入裂解緩沖液Buffer?A?5mL，
攪動緩沖液，使菌體懸起；
(5)菌體重量以濕重計每克菌體加入5μL濃度為100mmol/L的PMSF，5μL濃度為
100mg/mL的溶菌酶，于冰上攪動；
(6)破碎菌體，樣品置于冰上，超聲，并于4℃高速離心處理；
(7)沉淀用洗滌緩沖液Buffer?B洗滌，并于4℃高速離心處理，沉淀包涵體，重復(fù)一次；
(8)包涵體沉淀用變性緩沖液Buffer?C溶解，室溫下攪拌30min；
(9)充分混勻后室溫高速離心處理，棄沉淀，取上清，即得到重組豬干擾素γ-Fc融合
蛋白變性溶液；
(10)取適量用變性緩沖液Buffer?C溶解的重組豬干擾素γ-Fc融合蛋白變性溶液，用復(fù)
性緩沖液Buffer?D將重組豬干擾素γ-Fc融合蛋白變性溶液的濃度稀釋至0.2mg/mL，4℃透析
復(fù)性24h，將復(fù)性后重組蛋白溶液用0.45μm濾膜過濾，即得到重組豬干擾素γ-Fc融合蛋白復(fù)
性溶液；
所述Buffer?A為：含量為50mmol/L的Tris–HCl，含量為0.15mol/L的NaCl，含量為1mmol/L
的EDTA，以及含量為0.1mmol/L的PMSF，溶液基質(zhì)為蒸餾水，pH為7.5；
所述BufferB為：含量為50mmol/L的Tris–HCl，含量為0.15mol/L的NaCl，含量為1mmol/L
的EDTA,體積百分比為0.5％的Triton?X-100，以及含量為0.5mol/L的尿素，溶液基質(zhì)為蒸餾
水，pH為7.5；
所述Buffer?C為：含量為50mmol/L的Tris–HCl，含量為0.15mol/L的NaCl，含量為1mmol/L
的EDTA，含量為0.1mmol/L的PMSF，含量為8mol/L的鹽酸胍，以及含量為20mmol/L的DTT，
溶液基質(zhì)為蒸餾水，pH為7.8；
所述Buffer?D為：含量為50mmol/L的Tris–HCl，含量為1mmol/L的EDTA，以及GSH
和GSSG，所述GSH:GSSG的摩爾比為7:1，溶液基質(zhì)為蒸餾水，pH為7.5。