本發明涉及一種提高桿狀病毒殺蟲效率的遺傳改造方法，屬于基因工程領域；本發明以pEGFP?N1載體為模板擴增EGFP基因，雙酶切后連入質粒pFastBacDUAL，得重組質粒pDUAL?EGFP；根據基因序列及其開放閱讀框設計合成引物；以豆天蛾核型多角體病毒基因組DNA作為模板，進行PCR擴增，回收目的片段，雙酶切后連入經同樣雙酶切的重組質粒pDUAL?EGFP，得重組質粒pDUAL?EGFP?Clbi138；轉化含有家蠶核型多角體病毒的大腸桿菌菌株，培養純化后接種于LB液體培養基，振蕩培養，提取重組BmNPV DNA；并通過實驗首次證實重組BmNPV的殺蟲效率顯著增強，半致死濃度比對照組減少11倍，半數致死時間比對照組縮短42.9%，且病蟲體內液化更嚴重，從而達到提高蟲害的防治效果，具有明顯的經濟和生態效益，具有廣闊的應用前景。

1.一種提高桿狀病毒殺蟲效率的遺傳改造方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）以pEGFP-N1載體為模板，PCR擴增EGFP基因，經雙酶切后連入供體質粒
pFastBacDUAL，形成重組質粒pDUAL-EGFP；
（2）根據Clbi138基因序列及其開放閱讀框設計并合成引物；
（3）以豆天蛾核型多角體病毒（ClbiNPV）基因組DNA作為模板，以步驟（2）合成的引物進
行PCR擴增后，瓊脂糖凝膠電泳切膠回收目的片段，經雙酶切后，連入經同樣雙酶切的重組
質粒pDUAL-EGFP，形成重組供體質粒pDUAL-EGFP-Clbi138；
（4）分別取pDUAL-EGFP 、pDUAL-EGFP-Clbi138轉化含有家蠶核型多角體病毒（BmNPV）
的大腸桿菌DH10B菌株，涂布于LB平板培養基，靜止培養使藍斑顯色充分，挑取白色菌落，進
一步在LB平板培養基上劃線純化；將純化的白色菌落接種于含卡那霉素、四環素、慶大霉素
的LB液體培養基，振蕩培養后，提取重組BmNPV DNA，分別記為vBm^EGFP、vBm^EGFP/Clbi138；
由該遺傳改造方法得到的重組家蠶核型多角體病毒包含來自豆天蛾核型多角體病毒
（ClbiNPV）的Clbi138基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其氨基酸序列如SEQ ID
NO.2所示；
步驟（3）中所述的重組供體質粒pDUAL-EGFP-Clbi138中，EGFP基因位于p10啟動子下
游，Clbi138基因位于多角體基因PH啟動子下游。
2. 根據權利要求1所述的一種提高桿狀病毒殺蟲效率的遺傳改造方法，其特征在于，
步驟（2）中所述的引物為P3和P5，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.7所示。
3.根據權利要求1所述的方法得到的重組家蠶核型多角體病毒，其中表達的Clbi138蛋
白具有金屬蛋白酶活性，能加速病蟲體內組織的降解。
4.根據權利要求1所述的方法得到的重組家蠶核型多角體病毒在制備殺蟲劑中的應
用。