1.一種優質肉雞多目標性狀的快速聚合育種方法,其特征是,包括以下步驟:(1)提取雞的基因組DNA;(2)引物設計:根據雞的生長分化因子9、雌激素受體、多巴胺受體1、多巴胺受體2、血管活性腸肽受體2基因序列設計聚合酶鏈式反應擴增引物;生長分化因子9上游引物序列5’-tggagggtacgtggaggat-3’,下游引物序列5’-cacacctacctgtaatcggt-3’;雌激素受體上游引物序列:5’-gatgcacgcatagcttttca-3’,下游引物序列:5’-acggaaaagagtcagcctca-3’多巴胺受體1上游引物序列:5’-gctgtggctgagtttccttc-3’,下游引物序列:5’-acccttggaacacactgagg-3’;多巴胺受體2上游引物序列:5’-aacccaccctcctcagactt-3’;下游引物序列:5’-ggatggagatgggagacaga-3’;血管活性腸肽受體2基因序列上游引物序列:5’-gttggggagtggaggttcag-3’;下游引物序列:5’-attgggctggagatggcaaa -3’;(3)聚合酶鏈式反應:采用20 μL反應體系:在PCR反應管中25 mmol/L 10×buffer 2 μL;10 pmol/μL Mg2+ 2.2 μL;2.5 mmol/L dNTPs 0.8 μL,DNA 模板1 μL,10 pmol/L生長分化因子9上、下游引物各1 μL、或者10 pmol/L雌激素受體上、下游引物各1 μL、或者10pmol/L多巴胺受體1上、下游引物各1 μL、或者10 pmol/L多巴胺受體2上、下游引物各1 μL、或者10 pmol/L血管活性腸肽受體2基因序列上、下游引物各1 μL,5 U/μL TaqDNA 聚合酶0.2 μL,加超純水至20μL,將PCR反應管放入PCR儀分別進行反應擴增;(4)單核苷酸多態性反應:2 μL PCR 擴增產物加入 7 μL 上樣緩沖液,98 ℃變性 10min,然后冰浴 5 min;過夜凝膠電泳;(5)目的片段經SSCP分析,凝膠電泳后用銀染顯色,得到DNA的SSCP圖譜,根據5個圖譜中的帶型選擇選擇生長分化因子9、雌激素受體、多巴胺受體1、多巴胺受體2、血管活性腸肽受體2基因的基因型分別為QQ、GG、KK、TT、TT基因型的個體。2.根據權利要求1所述的優質肉雞多目標性狀的快速聚合育種方法,其特征是,所述PCR擴增反應程序為: 94 ℃預變性 5 min;94 ℃變性 30 s,退火 30 s,72 ℃延伸 30 s,30 個循環;最后 72 ℃延伸10 min,4℃保存,5對引物的退火溫度分別為58℃、60℃、60℃、59℃和61℃。3.根據權利要求1所述的優質肉雞多目標性狀的快速聚合育種方法,其特征是,步驟(4)中所述凝膠電泳中聚丙烯酰胺凝膠濃度為 10 %,凝膠交聯度為 29:1,電壓都為 150V。
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