1.一種洋蔥活性多肽提取物的制備方法,步驟如下:
(1)取洋蔥,切丁、勻漿,加入洋蔥重量1-3倍的0.2 mol/L pH 5.0-7.0的磷酸鹽緩沖液
浸泡,置于4℃冰箱12小時后,冷凍離心,上層即為洋蔥蛋白粗提液;
(2)向步驟(1)所得洋蔥蛋白粗提液中緩慢加入其1/3-1倍體積的95 v/v %乙醇,然后
用0.6 w/w %NaOH溶液調節pH 至8.0,冰浴中靜置過夜后,冷凍離心,收集沉淀,冷凍干燥即
得洋蔥蛋白凍干粉;
(3)向步驟(2)所得洋蔥蛋白凍干粉中加入6-8倍重量的蒸餾水稀釋,然后用0.1 mol/L
HCl調節pH至3.5;
(4)向步驟(3)所得溶液中按酶底比1:(8-12)加入酸性蛋白酶,在55℃下酶解1-3小時,
滅酶,冷卻至室溫;
步驟(4)中所述酶底比為酸性蛋白酶與步驟(2)所得洋蔥蛋白凍干粉的質量比;
所述酸性蛋白酶的活力為50000 u/g;
(5)用0.1 mol/L HCl調節步驟(4)所得溶液pH至1.5,按酶底比1:(50-70)加入胃蛋白
酶,在37℃下酶解1-3小時,滅酶,冷卻至室溫,4℃、20000轉/分鐘離心30 分鐘,收集上清
液;
步驟(5)中所述酶底比為胃蛋白酶與步驟(2)所得洋蔥蛋白凍干粉的質量比;
所述胃蛋白酶的活力為3000 u/mg;
(6)將步驟(5)收集的上清液用蒸餾水稀釋至為含多肽3-7 mg/mL的溶液,用葡聚糖凝
膠層析分離,收集分子量1000-3000 D的組分,冷凍干燥,即得到洋蔥活性多肽提取物凍干
粉。
2.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于:步驟(1)中,所述洋蔥為紫皮洋蔥;所
述磷酸鹽緩沖液pH為6.0;所述磷酸鹽緩沖液用量為洋蔥重量的2倍。
3.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于:步驟(2)中,所述95 v/v %乙醇用量為
洋蔥蛋白粗提液體積的0.5倍。
4.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于:步驟(3)中,所述蒸餾水用量為洋蔥蛋
白凍干粉重量的7倍。
5.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于:步驟(4)中,所述酶底比為1:10;所述
酶解時間為2小時;所述滅酶條件為95℃、15分鐘。
6.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于:步驟(5)中,所述酶底比為1:60;所述
酶解時間為2小時;所述滅酶條件為95℃、15分鐘。
7.根據權利要求1所述的制備方法,其特征在于:步驟(6)中,將步驟(5)收集的上清液
用蒸餾水稀釋至為含多肽5 mg/mL的溶液,葡聚糖凝膠層析的分離條件為:凝膠色譜柱為
Superdex Peptide 10/300GL,流動相為0.2 mol/L的pH 7.4磷酸鹽緩沖液,流速0.5 mL/
min。
8.根據權利要求1-7中任一所述的制備方法制得的洋蔥活性多肽提取物在制備具有口
服降糖和/或降脂作用的藥物中的應用。
9.根據權利要求1-7中任一所述的制備方法制得的洋蔥活性多肽提取物在制備具有口
服降糖和/或降脂作用的食品中的應用。
10.根據權利要求1-7中任一所述的制備方法制得的洋蔥活性多肽提取物在制備具有
口服降糖和/或降脂作用的保健食品中的應用。
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