本發(fā)明涉及含破傷風(fēng)毒素抗原蛋白基因的重組載體，用該載體轉(zhuǎn)化的宿主，利用轉(zhuǎn)化體生產(chǎn)破傷風(fēng)毒素抗原，以及該抗原蛋白在破傷風(fēng)疫苗及結(jié)合疫苗蛋白載體中的應(yīng)用。本發(fā)明的重組質(zhì)粒載體含有破傷風(fēng)毒素抗原蛋白的基因，由破傷風(fēng)毒素抗原蛋白基因與原核表達(dá)載體pET-22b(+)連接構(gòu)建而成。本發(fā)明的轉(zhuǎn)化體是由所述重組質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌而得。本發(fā)明的表達(dá)系統(tǒng)對(duì)表達(dá)破傷風(fēng)毒素抗原蛋白是高效的，表達(dá)量為15％，純化的表達(dá)蛋白純度可達(dá)96.5％。本發(fā)明的破傷風(fēng)毒素抗原具有較好的免疫原性，其可用于制備破傷風(fēng)疫苗、結(jié)合疫苗的載體蛋白。

1.一種重組質(zhì)粒載體，由破傷風(fēng)毒素抗原蛋白的基因與表達(dá)載體pET-22b(+)連接構(gòu)建成，其特征在于破傷風(fēng)毒素抗原蛋白的基因是來(lái)自保藏號(hào)為CMCC?64008的破傷風(fēng)梭狀芽胞桿菌株的破傷風(fēng)毒素C片段基因。2.一種轉(zhuǎn)化體，其由如權(quán)利要求1所述的重組質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE)而得。3.一種制備破傷風(fēng)抗原蛋白的方法，包括用如權(quán)利要求1所述的重組質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE)，克隆并表達(dá)，獲得破傷風(fēng)毒素抗原蛋白。4.一種制備破傷風(fēng)抗原蛋白的方法，包括以下步驟：(1)培養(yǎng)保藏號(hào)為CMCC?64008的破傷風(fēng)梭狀芽胞桿菌株，取培養(yǎng)裂解物作為擴(kuò)增模板；設(shè)計(jì)兩端帶有BamH?I和Hind?III酶切位點(diǎn)的引物；通過(guò)PCR法進(jìn)行擴(kuò)增；純化PCR產(chǎn)物；(2)將第(1)步所得純化的PCR產(chǎn)物與pGEM-T?Easy載體連接，構(gòu)建重組克隆質(zhì)粒；所述克隆質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE)感受態(tài)細(xì)胞，得到陽(yáng)性克??；(3)將內(nèi)切酶BamH?I、Hind?III酶切處理在目的基因兩側(cè)帶有限制性內(nèi)切酶BamH?I、Hind?III識(shí)別位點(diǎn)的所述克隆質(zhì)粒得到目的基因，與經(jīng)相同酶切處理的表達(dá)載體pET-22b(+)連接，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE)的感受態(tài)細(xì)胞，得到陽(yáng)性克??；表達(dá)、獲得重組蛋白破傷風(fēng)毒素抗原。5.一種破傷風(fēng)疫苗，其含有按照權(quán)利要求3的方法制備的破傷風(fēng)毒素抗原蛋白。6.一種結(jié)合疫苗，其含有按照權(quán)利要求3的方法制備的破傷風(fēng)毒素抗原蛋白作為破傷風(fēng)抗原蛋白載體。7.一種結(jié)合疫苗的蛋白載體，其含有按照權(quán)利要求3的方法制備的破傷風(fēng)毒素抗原蛋白。8.一種破傷風(fēng)疫苗的制備方法，其包括以下步驟：用如權(quán)利要求1所述的重組質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE)，克隆并表達(dá)破傷風(fēng)毒素抗原蛋白，獲得破傷風(fēng)毒素抗原蛋白。