本發明公開了一種血管內皮細胞的培養方法，1)將多能干細胞于培養基A中分化成中內胚層前體細胞；2)將中內胚層前體細胞于培養基B中分化成血管內皮細胞祖細胞；3)將血管內皮細胞祖細胞于培養基C中分化成血管內皮細胞；培養基A含DMEM培養基、F12培養基、硒酸鈉、碳酸氫鈉、維生素C、胰島素、激活素A、骨形成蛋白4、糖原合成酶激酶?3抑制劑；培養基B含DMEM培養基、F12培養基、硒酸鈉、碳酸氫鈉、維生素C、胰島素、血管內皮生長因子和轉化生長因子β信號通路抑制劑；培養基C含DMEM培養基、F12培養基、硒酸鈉、碳酸氫鈉、維生素C、胰島素、血管內皮生長因子、表皮生長因子和成纖維細胞生長因子。該方法將多能干細胞分化形成血管內皮細胞。

1.一種血管內皮細胞的培養方法，其特征在于，所述培養方法包括：
1)將多能干細胞于培養基A中誘導分化形成中內胚層前體細胞；
2)將所述中內胚層前體細胞于培養基B中誘導分化形成血管內皮細胞祖細胞；
3)將所述血管內皮細胞祖細胞于培養基C中誘導分化形成血管內皮細胞；
其中，所述培養基A含有DMEM培養基、F12培養基、硒酸鈉、碳酸氫鈉、維生素C、胰島素、
激活素A、骨形成蛋白4、糖原合成酶激酶-3抑制劑；所述培養基B含有DMEM培養基、F12培養
基、硒酸鈉、碳酸氫鈉、維生素C、胰島素、血管內皮生長因子和轉化生長因子β信號通路抑制
劑；所述培養基C含有DMEM培養基、F12培養基、硒酸鈉、碳酸氫鈉、維生素C、胰島素、血管內
皮生長因子、表皮生長因子和成纖維細胞生長因子；
其中，在所述培養基A中，所述DMEM培養基與F12培養基的體積比為1：1-1：4，所述維生
素C的濃度為1-100μg/ml，所述胰島素的濃度為1-100μg/ml，所述激活素A的濃度為5-
100ng/ml，所述骨形成蛋白4的濃度為1-100ng/ml，所述糖原合成酶激酶-3抑制劑的濃度為
1-100μM，所述硒酸鈉的濃度為1-100μg/L，所述碳酸氫鈉的濃度為100-1000mg/L；
在所述培養基B中，所述DMEM培養基與F12培養基的體積比為1：1-1：4，所述維生素C的
濃度為1-100μg/ml，所述胰島素的濃度為1-100μg/ml，所述血管內皮生長因子的濃度為5-
100ng/ml，所述轉化生長因子β信號通路抑制劑的濃度為1-50μM，所述硒酸鈉的濃度為1-
100μg/L，所述碳酸氫鈉的濃度為100-1000mg/L；
在所述培養基C中，所述DMEM培養基與F12培養基的體積比為1：1-1：4，所述維生素C的
濃度為1-100μg/ml，所述胰島素的濃度為1-100μg/ml，所述血管內皮生長因子的濃度為5-
100ng/ml，所述表皮生長因子的濃度為5-100ng/ml，所述成纖維細胞生長因子的濃度為5-
100ng/ml，所述硒酸鈉的濃度為1-100μg/L，所述碳酸氫鈉的濃度為100-1000mg/L。
2.根據權利要求1所述的培養方法，其中，在所述培養基A中，所述DMEM培養基與F12培
養基的體積比為1：1-1：4，所述維生素C的濃度為20-100μg/ml，所述胰島素的濃度為5-50μ
g/ml，所述激活素A的濃度為5-50ng/ml，所述骨形成蛋白4的濃度為1-50ng/ml，所述糖原合
成酶激酶-3抑制劑的濃度為2-40μM，所述硒酸鈉的濃度為1-50μg/L，所述碳酸氫鈉的濃度
為200-700mg/L；
在所述培養基B中，所述DMEM培養基與F12培養基的體積比為1：1-1：4，所述維生素C的
濃度為20-100μg/ml，所述胰島素的濃度為5-50μg/ml，所述血管內皮生長因子的濃度為5-
50ng/ml，所述轉化生長因子β信號通路抑制劑的濃度為1-20μM，所述硒酸鈉的濃度為1-50μ
g/L，所述碳酸氫鈉的濃度為200-700mg/L；
在所述培養基C中，所述DMEM培養基與F12培養基的體積比為1：1-1：4，所述維生素C的
濃度為20-100μg/ml，所述胰島素的濃度為5-50μg/ml，所述血管內皮生長因子的濃度為5-
50ng/ml，所述表皮生長因子的濃度為5-50ng/ml，所述成纖維細胞生長因子的濃度為5-
50ng/ml，所述硒酸鈉的濃度為1-50μg/L，所述碳酸氫鈉的濃度為200-700mg/L。
3.根據權利要求2所述的培養方法，其中，在所述培養基A中，所述DMEM培養基與F12培
養基的體積比為1：1-1：4，所述維生素C的濃度為50-100μg/ml，所述胰島素的濃度為10-30μ
g/ml，所述激活素A的濃度為10-30ng/ml，所述骨形成蛋白4的濃度為2-10ng/ml，所述糖原
合成酶激酶-3抑制劑的濃度為10-30μM，所述硒酸鈉的濃度為2-30μg/L，所述碳酸氫鈉的濃
度為400-600mg/L；
在所述培養基B中，所述DMEM培養基與F12培養基的體積比為1：1-1：4，所述維生素C的
濃度為50-100μg/ml，所述胰島素的濃度為10-30μg/ml，所述血管內皮生長因子的濃度為
10-30ng/ml，所述轉化生長因子β信號通路抑制劑的濃度為5-10μM，所述硒酸鈉的濃度為2-
30μg/L，所述碳酸氫鈉的濃度為400-600mg/L；
在所述培養基C中，所述DMEM培養基與F12培養基的體積比為1：1-1：4，所述維生素C的
濃度為50-100μg/ml，所述胰島素的濃度為10-30μg/ml，所述血管內皮生長因子的濃度為
10-30ng/ml，所述表皮生長因子的濃度為10-30ng/ml，所述成纖維細胞生長因子的濃度為
10-30ng/ml，所述硒酸鈉的濃度為2-30μg/L，所述碳酸氫鈉的濃度為400-600mg/L。
4.根據權利要求1-3中任意一項所述的培養方法，其中，所述糖原合成酶激酶-3抑制劑
選自牌號為BIO和/或CHIR99021的抑制劑。
5.根據權利要求1-3中任意一項所述的培養方法，其中，所述轉化生長因子β信號通路
抑制劑為牌號為SB431542的抑制劑。
6.根據權利要求1-3中任意一項所述的培養方法，其中，所述成纖維細胞生長因子選自
堿性成纖維細胞生長因子。
7.根據權利要求1-3中任意一項所述的培養方法，其中，所述培養基A還含有Rho蛋白激
酶抑制劑。
8.根據權利要求7所述的培養方法，其中，所述Rho蛋白激酶抑制劑為牌號Y27632的抑
制劑。
9.根據權利要求7所述的培養方法，其中，所述Rho蛋白激酶抑制劑的濃度為1-50μM。
10.根據權利要求1-3、8-9中任意一項所述的培養方法，其中，在步驟1)之前，所述培養
方法還包括將多能干細胞消化至單層多能干細胞。
11.根據權利要求10所述的培養方法，其中，將多能干細胞消化至單層多能干細胞的步
驟為：將融合度為70-80％的多能干細胞通過PBS緩沖液清洗，接著通過胰蛋白酶消化，然后
將下消化后的單層細胞轉移至培養皿中進行誘導分化。
12.根據權利要求11所述的培養方法，其中，所述消化滿足以下條件：消化時間為3-
6min。
13.根據權利要求11所述的培養方法，其中，以所述培養皿的上表面的面積為基準，所
述單層細胞的占據面積為0.1-0.2。
14.根據權利要求1-3、8-9中任意一項所述的培養方法，其中，在步驟1)之前，所述培養
方法還包括將Matrigel基質膠或者玻璃粘連蛋白包被培養容器。
15.根據權利要求1-3、8-9中任意一項所述的培養方法，其中，所述多能干細胞為人類
多能干細胞。