一種高特異性的葉酸完全抗原合成方法及其應用，屬于生物化工技術領域。本發(fā)明是在載體蛋白溶液中加入6?氨基己酸與水溶性碳二亞胺后室溫下反應，透析后得到修飾了連接臂的載體蛋白B。葉酸（N?{4?[(2?氨基?1,4?二氫?4?氧代?6?喋啶)甲氨基]苯甲酰基}?L?谷氨酸）溶解于二甲亞砜，加入二環(huán)己基碳二亞胺與羥基琥珀酰亞胺，反應生成葉酸衍生物，再與載體蛋白B連接臂上的氨基進行偶聯(lián)，得到完全抗原。結果表明，用本發(fā)明的抗原免疫動物得到的抗血清效價達81000，檢測限0.042ng/mL，半抑制濃度0.3ng/mL。產(chǎn)生的抗體特異性高、靈敏度高。本發(fā)明的抗原或抗體用于免疫親和柱的制備及建立酶聯(lián)免疫吸附分析方法和膠體金試紙快速檢測法，用于檢測葉酸殘留。

1.一種高特異性的葉酸完全抗原合成方法，其特征在于步驟為：在載體蛋白溶液中加
入6-氨基己酸ε-ACA與水溶性碳二亞胺EDC，在室溫下反應，透析后得到修飾了連接臂的載
體蛋白B；將葉酸N-{4-[(2-氨基-1,4-二氫-4-氧代-6-喋啶)甲氨基]苯甲酰基}-L-谷氨酸
溶解于二甲亞砜DMSO中，加入二環(huán)己基碳二亞胺DCC與N-羥基丁二酰亞胺NHS，反應生成葉
酸衍生物，再加入修飾了連接臂的載體蛋白B，調(diào)節(jié)反應pH值8.5，與載體蛋白B上的氨基進
行偶聯(lián)，透析，得到高特異性的葉酸完全抗原。
2.根據(jù)權利要求1所述高特異性的葉酸完全抗原合成方法，其特征在于：所述載體蛋白
為牛血清白蛋白BSA或雞卵清白蛋白OVA。
3.根據(jù)權利要求1所述高特異性的葉酸完全抗原合成方法，其特征在于具體步驟如下：
（1）修飾載體蛋白：取載體蛋白50mg溶解于5mL pH9.6碳酸鹽緩沖溶液中，再加入100mg
6-氨基己酸，30mg水溶性碳二亞胺；調(diào)節(jié)體系pH值于6~8，室溫下反應4h；用PBS緩沖液透析2
天，期間換水4次，即得到修飾了連接臂的載體蛋白B；
（2）葉酸完全抗原的制備：
取25mg葉酸，加入2.5mL DMSO溶解，調(diào)節(jié)pH值為7.4，再分別加入10mg N-羥基丁二酰亞
胺NHS，23mg DCC，室溫下避光混勻，攪拌反應4h，將步驟（1）制備的修飾了連接臂的載體蛋
白B 100mg加入反應液中，調(diào)節(jié)pH值為8.5，在室溫25℃下避光反應2h；用PBS緩沖液透析2
天，期間換水4次，即得到葉酸完全抗原。
4.權利要求1所述高特異性的葉酸完全抗原的應用，其特征在于：通過葉酸完全抗原化
合物免疫動物得到多克隆抗體或單克隆抗體，并應用于檢測葉酸中。