本發(fā)明公開一種金納米簇為熒光探針的葡萄糖測定方法,涉及以N?乙酰?L?半胱氨酸保護(hù)的金納米簇為熒光探針的葡萄糖測定方法，其特征是利用葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖生成HO，F(xiàn)e催化HO產(chǎn)生羥自由基使金納米簇的熒光發(fā)生猝滅，從而表現(xiàn)出熒光發(fā)射光譜特征的變化，可以用于葡萄糖的檢測。在0.39~27.22μmol/L范圍內(nèi)金納米簇?zé)晒忖缰郸與葡萄糖濃度呈線性關(guān)系，檢測限為0.18μmol/L。本發(fā)明靈敏度高，重現(xiàn)性好，可用于食品、工業(yè)、環(huán)境及生命體系中葡萄糖的測定。

1.一種金納米簇為熒光探針的葡萄糖測定方法，其特征是利用葡萄糖氧化酶氧化葡萄
糖生成H₂O₂，F(xiàn)e²⁺催化H₂O₂產(chǎn)生羥自由基使金納米簇的熒光發(fā)生猝滅，從而表現(xiàn)出熒光發(fā)射
光譜特征的變化，能用于葡萄糖的檢測；所使用的金納米簇采用N-乙酰-L-半胱氨酸還原氯
金酸的方法制備：將濃度為0.02~0.18 mol/L 的N-乙酰-L-半胱氨酸溶液和濃度為0.1~0.8
mol/L的氫氧化鈉溶液加入到濃度為0.01~0.1 g/L的氯金酸溶液中，混勻，置于20~70℃水
浴恒溫反應(yīng)2.5小時，反應(yīng)結(jié)束后用截留分子量為3500的透析袋對反應(yīng)液進(jìn)行透析純化處
理，得到N-乙酰-L-半胱氨酸保護(hù)的金納米團(tuán)簇?zé)晒獠牧纤芤骸?br/>2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金納米簇為熒光探針的葡萄糖測定方法，其特征是所使用的
金納米簇優(yōu)選采用N-乙酰-L-半胱氨酸還原氯金酸的方法制備：將濃度為0.08 mol/L 的N-
乙酰-L-半胱氨酸溶液和濃度為0.5 mol/L的氫氧化鈉溶液加入到濃度為0.02 g/L的氯金
酸溶液中，混勻，置于37℃水浴恒溫反應(yīng)2.5小時，反應(yīng)結(jié)束后用截留分子量為3500的透析
袋對反應(yīng)液進(jìn)行透析純化處理，得到N-乙酰-L-半胱氨酸保護(hù)的金納米團(tuán)簇?zé)晒獠牧纤?br/>液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金納米簇為熒光探針的葡萄糖測定方法，其特征是利用N-乙
酰-L-半胱氨酸保護(hù)的金納米簇在650 nm處的發(fā)射光強(qiáng)度值（F₆₅₀）以判斷葡萄糖含量，所使
用的激發(fā)波長為355 nm。
4.一種金納米簇為熒光探針的葡萄糖測定方法，包括如下步驟：1）將含不同濃度葡萄
糖的溶液，所述葡萄糖溶液中含有濃度為20 mmol/L、pH=7.4的HEPES，加入葡萄糖氧化酶溶
液中，然后置于25℃反應(yīng)5~50分鐘；2）將含有濃度為40 mmol/L硫酸的Fe²⁺溶液與金納米團(tuán)
簇溶液依次加入步驟1）的反應(yīng)液中，搖勻后置于25℃水浴鍋反應(yīng)1~15分鐘，測定熒光強(qiáng)度
值F₆₅₀，隨著葡萄糖濃度的不斷增大，F(xiàn)₆₅₀逐漸減小，在0.39~27.22 μmol/L范圍內(nèi)熒光猝滅
值ΔF₆₅₀與葡萄糖濃度呈線性關(guān)系，檢測限為0.18 μmol/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的金納米簇為熒光探針的葡萄糖測定方法，其特征是步驟1）所
使用的葡萄糖氧化酶的濃度為0.1 mg/mL，反應(yīng)時間為30分鐘；步驟2）所使用Fe²⁺溶液的終
濃度為100 μmol/L，反應(yīng)時間為10分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的金納米簇為熒光探針的葡萄糖測定方法，其特征是葡萄糖
溶液，葡萄糖氧化酶溶液，F(xiàn)e²⁺溶液，金納米簇溶液按體積比7：1：2：8混合，反應(yīng)總體積為
0.45 mL。
7.一種金納米簇為熒光探針的血糖測定方法，包括如下步驟,1）取新鮮人血液，經(jīng)超濾
處理后用pH=7.4的緩沖液稀釋，取0.175 mL稀釋液加入到0.025毫升濃度為0.1 mg/mL的葡
萄糖氧化酶溶液中，置于25℃反應(yīng)30分鐘；2）將0.05毫升濃度為0.9 mmol/L的含有40
mmol/L硫酸的Fe²⁺溶液與0.2毫升金納米團(tuán)簇溶液依次加入上述步驟1）的反應(yīng)液中，搖勻后
置于25℃水浴鍋反應(yīng)10分鐘，測定熒光強(qiáng)度值F₆₅₀，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量，獲得血樣中的
葡萄糖含量。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的金納米簇為熒光探針的血糖測定方法，其特征是所使用的金
納米簇采用N-乙酰-L-半胱氨酸還原氯金酸的方法制備：將0.6 mL濃度為0.5 mol/L的氫氧
化鈉溶液與0.4 mL濃度為0.02 g/L的氯金酸溶液加入到4 mL濃度為0.08 mol/L的N-乙酰-
L-半胱氨酸溶液中，混勻，置于37℃恒溫水浴槽中反應(yīng)2.5 h，反應(yīng)液由淺黃色變?yōu)闊o色，反
應(yīng)結(jié)束后用截留分子量為3500的透析袋對反應(yīng)液進(jìn)行純化處理，純化后的金納米簇溶液放
置于4℃冰箱避光保存。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的金納米簇為熒光探針的血糖測定方法，其特征是所述的新鮮
人血液用截留分子為3000的超濾管離心超濾，濾液用pH=7.4的HEPES緩沖液稀釋200倍后測
定。