本發明公開了一種高產乙酰氨基葡萄糖重組枯草芽孢桿菌及其應用，屬于遺傳工程領域。本發明是以枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis168）作為出發菌株，通過同源重組敲除乙酰氨基葡萄糖轉運蛋白編碼基因（nagP），阻斷了宿主菌從胞外轉運乙酰氨基葡萄糖至胞內途徑。在已敲除nagP的宿主菌內，過量表達來源于釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae S288C）的氨基葡萄糖乙酰化酶編碼基因（GNA1），加強乙酰氨基葡萄糖合成途徑，提高了重組枯草芽孢桿菌中乙酰氨基葡萄糖的產量，達到415mg/L，為進一步代謝工程改造枯草芽孢桿菌生產氨基葡萄糖奠定了基礎。

1.一種高產乙酰氨基葡萄糖重組枯草芽孢桿菌，其特征在于是將釀酒酵母（Saccharomyces?
cerevisiae）S288C中氨基葡萄糖乙酰化酶編碼基因GNA1克隆到枯草芽孢桿菌，同時敲除該
枯草芽孢桿菌乙酰氨基葡萄糖轉運蛋白編碼基因nagP構建而成的重組枯草芽孢桿菌；將氨基
葡萄糖乙酰化酶編碼基因連接到表達載體pP43NMK上；所述枯草芽孢桿菌為Bacillus?subtilis
168。
2.根據權利要求1所述重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，所述氨基葡萄糖乙酰化酶編碼基因
如NCBI-Gene?ID:850529所示，乙酰氨基葡萄糖轉運蛋白編碼基因如NCBI-Gene?ID:938807
所示。
3.權利要求1所述重組枯草芽孢桿菌的構建方法，其特征在于包括如下步驟：
1）敲除乙酰氨基葡萄糖轉運蛋白編碼基因
構建乙酰氨基葡萄糖轉運蛋白編碼基因敲除框，通過同源重組將敲除框中的博來霉素抗
性基因zeo替代枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）168基因組中乙酰氨基葡萄糖轉運蛋白編碼
基因nagP；
2）構建產乙酰氨基葡萄糖重組枯草芽孢桿菌
克隆釀酒酵母（Saccharomyces?cerevisiae）S288C的氨基葡萄糖乙酰化酶編碼基因，連接
到質粒pP43NMK上；將重組質粒轉化已敲除乙酰氨基葡萄糖轉運蛋白編碼基因枯草芽孢桿
菌，得到產乙酰氨基葡萄糖重組枯草芽孢桿菌。
4.應用權利要求1-2任一所述重組枯草芽孢桿菌發酵生產乙酰氨基葡萄糖的方法，將37oC、
200rpm下培養12h的重組枯草芽孢桿菌以5%的接種量轉入發酵培養基，于37℃、200rpm
條件下發酵30h。