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一種基于CRISPRi的共利用葡萄糖和木糖生產N-乙酰氨糖的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-09-15
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201810036701.9 
  • 技術(專利)名稱 一種基于CRISPRi的共利用葡萄糖和木糖生產N-乙酰氨糖的方法 
  • 項目單位 江南大學
  • 發明人 劉龍,陳堅,堵國成,李江華,武耀康,陳泰馳 
  • 行業類別 中藥材獲取-非動植物采選
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 陳真文
  • 發布時間 2021-09-15  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種基于CRISPRi的共利用葡萄糖和木糖生產N?乙酰氨糖的方法,屬于遺傳工程領域。本發明以枯草芽孢桿菌BSGNY?P?glmS?P?GNA1為出發菌株,在基因組上整合了受木糖誘導的dCas9以及三個可分別作用于zwf,pfkA和glmM三個基因的sgRNA表達片段,并利用該菌株在搖瓶發酵,使N?乙酰氨基葡萄糖產量達到20.5g/L,N?乙酰氨基葡萄糖得率為0.612g/g葡萄糖,同時實現了重組枯草芽孢桿菌對于葡糖糖和木糖的高效共利用,并為進一步代謝工程改造枯草芽孢桿菌生產氨基葡萄糖及其工業化奠定了基礎。
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  • 02

    說明書

    1.一種基因工程菌,其特征在于,能夠共利用葡萄糖和木糖生產N-乙酰氨基葡萄糖;所述共利用葡萄糖和木糖生產N-乙酰氨基葡萄糖是利用dCas9蛋白和sgRNA調控糖酵解、磷酸戊糖及肽聚糖合成三條途徑中的zwf,pfkA與glmM基因實現的;所述基因工程菌以枯草芽孢桿菌BSGNY-Pveg-glmS-P43-GNA1為出發菌株。2.根據權利要求1所述的基因工程菌,其特征在于,基因工程菌整合表達了dCas9蛋白,并整合了三個分別作用于zwf,pfkA與glmM基因的sgRNA表達片段。3.根據權利要求2所述的基因工程菌,其特征在于,所述dCas9蛋白通過載體pLCx進行整合表達。4.權利要求3所述基因工程菌的構建方法,其特征在于,以所述枯草芽孢桿菌為出發菌株,以載體pLCx將d Cas9蛋白整合表達,并將作用于zwf,pfkA與glmM基因的sgRNA表達片段用載體psga整合表達。5.一種共利用葡萄糖與木糖生產N-乙酰氨基葡萄糖的方法,其特征在于,將權利要求1~2任一所述的基因工程菌接種入發酵培養基,發酵生產N-乙酰氨基葡萄糖。6.根據權利要求5所述的方法,其特征在于,所述發酵培養基含有葡萄糖和木糖,或含有能夠水解為葡萄糖和木糖的原料。7.根據權利要求5所述的方法,其特征在于,所述方法是將重組枯草芽孢桿菌接種入含葡萄糖的發酵培養基,在3-9h內添加濃度為5-20g/L的木糖。8.根據權利要求7所述的方法,其特征在于,所述方法是將生產菌株活化后,以5-10%的接種量轉入發酵培養基,35-38℃、150-250rpm條件下培養24-60h。9.權利要求1所述的基因工程菌在食品、日化領域或制備藥物、保健品方面的應用。
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