本發明公開了一種大腸桿菌發酵生產琥珀酸的方法，包括如下步驟：(1)將活化的大腸桿菌接種于含有特定碳源的培養基中，好氣培養，擴增菌體，也可使用葡萄糖為初始碳源，消耗后繼續以特定碳源培養；(2)將所說的菌體于含有葡萄糖及MgCO或NaHCO或NaCO的培養基中厭氧發酵生產琥珀酸。本發明的方法，通過對大腸桿菌代謝的控制，使得大腸桿菌高表達其本身固有的糖異生及補給途徑相關酶，能夠在琥珀酸生產過程中實現高生產速率。

1.一種大腸桿菌生產琥珀酸的方法，其特征在于，包括如下步驟：(1)將活化的大腸桿菌接種于含有特定碳源的培養基中，好氣培養，獲得好氣培養液或菌體；(2)將所說的菌體或好氣培養液于含有葡萄糖及MgCO₃或NaHCO₃或Na₂CO₃的培養基中厭氧發酵，生產琥珀酸；所說的特定碳源為延胡索酸、α-酮戊二酸、乙酸、丙酮酸或乳酸，或以上有機酸的可溶性鹽。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，先以葡萄糖為碳源好氣增殖大腸桿菌，葡萄糖消耗后繼續以所述的有機酸或其可溶性鹽進一步好氣增殖大腸桿菌。3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在所得到的好氣培養液中直接補充葡萄糖和MgCO₃或NaHCO₃、Na₂CO₃，進行厭氧培養，或將菌體分離后轉入新的含有葡萄糖和MgCO₃或NaHCO₃、Na₂CO₃的培養基厭氧培養。4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中使用的厭氧培養基是滿足菌體生長的完全培養基，或是生長限制而能夠代謝葡萄糖的不完全培養基。5.根據權利要求1～4任一項所述的方法，其特征在于，大腸桿菌為野生菌或是缺失有關基因或過量表達有關基因的工程菌。