本發明涉及一種從黑加侖果渣中提取分離純化四種主要花色苷的方法。目的是提供一種簡便、經濟、綠色環保、收率高的從黑加侖果渣中提取分離純化四種高純度花色苷的方法。該方法以工業生產加工后的黑加侖廢渣為原料采用勻漿破碎偶合酶水解技術、負壓空化強化提取技術、大孔吸附樹脂樹脂富集技術、中壓快閃反向色譜分離技術以及低溫晶析和重結晶技術等得到純度可達95％的飛燕草素3?O?葡萄糖苷、飛燕草素3?O?蕓香糖苷、矢車菊素3?O?葡萄糖苷和矢車菊素3?O?蕓香糖苷四種花色苷單體成分。該方法的原料豐富易得、工藝耗時短、溶劑消耗少、所得花色苷純度高、生產成本低，適合用于規模化工業化生產。

1.一種從黑加侖果渣中提取分離純化四種花色苷的方法，其特征在于按如下工藝步驟進行：(1).勻漿破碎偶合酶水解黑加侖果渣：將黑加侖果渣加入質量體積比5～9倍的水進行勻漿破碎，將得到黑加侖果渣漿按質量比20～60mg/g加入纖維素酶、果膠酶或上述兩種酶的混合酶，放入恒溫搖床中進行酶解，抽濾，收集濾液濾渣；(2).負壓空化強化提取黑加侖濾渣：將得到的黑加侖濾渣用乙醇溶液進行負壓空化強化提取，乙醇濃度為70-90％，負壓空化提取壓力為-0.04～-0.09MPa，室溫下提取2-4次，提取時間為30～50min，提取結束后進行抽濾，將得到的濾液與步驟(1)中的濾液合并，減壓濃縮回收除去溶劑，得到黑加侖浸膏；(3).大孔吸附樹脂富集黑加侖花色苷：將得到的浸膏加入適量的水溶解進行離心，將得到的上清液加入D4020、AB-8、NKA-9、D3520、D101和DM-130大孔吸附樹脂柱中的一種，進行吸附富集，然后用蒸餾水進行非目標化合物的洗脫，棄去蒸餾水洗脫液，再用20～50％乙醇洗脫，收集洗脫液；減壓回收除去溶劑，得到黑加侖花色苷樹脂富集物；(4).中壓快閃反相色譜分離花色苷單體：步驟(3)得到的富集物用一定比例水，甲醇，甲酸溶液剛好溶解后上ODS-C₁₈反相硅膠中壓柱，選用流動相A-水:甲酸(90:10)，流動相B-乙腈：甲醇(85:15)，A:B＝93:7進行等梯度洗脫，洗脫流速為20～35mL/min，收集相應的洗脫液得到相應的花色苷單體；(5).低溫晶析和重結晶黑加侖花色苷：將得到的花色苷成分經過低溫晶析和重結晶得到純度可達95％的花色苷單體成分，分別為飛燕草素3-O-葡萄糖苷、飛燕草素3-O-蕓香糖苷、矢車菊素3-O-葡萄糖苷、矢車菊素3-O-蕓香糖苷。2.根據權利要求1所述的一種從黑加侖果渣中提取分離純化四種花色苷的方法，其特征在于加入按質量體積比5～9倍原材料的水進行勻漿破碎，連續勻漿破碎三次，每次4～9分鐘，將勻漿破碎后得到的漿液用檸檬酸或鹽酸將PH值調節到3～6，將得到黑加侖果渣漿按質量比20～60mg/g加入纖維素酶、果膠酶或上述兩種酶的混合酶，然后將漿液放入恒溫搖床中，在溫度20～50℃酶解1～5h，抽濾，收集濾液濾渣。3.根據權利要求1所述的一種從黑加侖果渣中提取分離純化四種花色苷的方法，其特征在于將上一步驟中的濾渣按質量體積比10～30倍的濾渣質量的乙醇進行負壓空化提取，乙醇濃度為70-90％，負壓空化提取壓力為-0.04～-0.09MPa，室溫下提取2～4次，提取時間為30～50min,將得到的濾液與步驟(1)中的濾液合并，減壓濃縮回收除去溶劑，得到黑加侖浸膏。4.根據權利要求1所述的一種從黑加侖果渣中提取分離純化四種花色苷的方法，其特征在于選用大孔吸附樹脂型號為D4020、AB-8、NKA-9、D3520、D101和DM-130樹脂中的一種，上述黑加侖浸膏按質量體積比分散于10～30倍浸膏質量的純水中后，離心取上層清液上樣加入大孔吸附樹脂柱，上樣體積為1～10倍柱體積，吸附飽和后用蒸餾水洗脫雜質至流出液無色，然后用20～50％乙醇洗脫，收集洗脫溶液，減壓回收除去溶劑，得到黑加侖花色苷樹脂富集物。5.根據權利要求1所述的一種從黑加侖果渣中提取分離純化四種花色苷的方法，其特征在于將黑加侖花色苷樹脂富集物加入初始流動相溶解后進行0.45μm過濾上樣，中壓層析柱填料為ODS-C₁₈反相硅膠，上樣體積為柱體積的1/10～1/5，選用流動相A-水：甲酸(90：10)，流動相B-乙腈：甲醇(85：15)，A：B＝93：7等梯度洗脫，洗脫流速為20～35mL/min，用HPLC在檢測波長520nm檢測流出物成分，合并相同部分。6.按照權利要求1所述的一種從黑加侖果渣中提取分離純化四種花色苷的方法，其特征在于其低溫晶析和重結晶所用溶劑為50～70％乙醇，用溶劑飽和溶解中壓柱層析得到的花色苷單體組分，然后進行低溫晶析和重結晶，晶析溫度為-4～20℃。