1.一種用于選擇編碼抗原特異性免疫球蛋白重鏈可變區或其抗原結合片段的方法，包
括：
(a)將編碼免疫球蛋白重鏈融合多肽的重組牛痘文庫引入允許牛痘病毒感染的宿主細
胞群體中，所述重組牛痘文庫包含在牛痘病毒載體中構建的編碼多個免疫球蛋白重鏈融合
多肽的第一多核苷酸文庫，其中所述牛痘病毒載體包含(1)編碼包含免疫球蛋白重鏈CH1結
構域的第一多肽區段的第一多核苷酸，(2)編碼包含位于所述CH1結構域下游的牛痘A56R胞
外包膜病毒(EEV)特異性膜蛋白的柄區、跨膜結構域和胞內結構域的第二多肽區段的第二
多核苷酸，和(3)編碼位于所述CH1結構域上游的免疫球蛋白重鏈可變區或其片段的第三多
核苷酸；
(b)將一個或多個編碼免疫球蛋白輕鏈的多核苷酸引入所述宿主細胞群體中，
其中免疫球蛋白融合蛋白能夠與免疫球蛋白輕鏈組合，以形成免疫球蛋白分子的抗原
結合結構域；
(c)允許EEV從所述宿主細胞釋放；
(d)從上清液收集釋放的EEV；
(e)將釋放的EEV接觸抗原；和
(f)回收第一多核苷酸文庫的編碼在EEV的膜表面上表達并且對于所述抗原具有特異
性的免疫球蛋白重鏈融合多肽的多核苷酸。
2.權利要求1的方法，進一步包括：
(g)將(f)中回收的多核苷酸引入允許牛痘病毒感染的第二宿主細胞群體中；
(h)將一個或多個編碼免疫球蛋白輕鏈的多核苷酸引入所述宿主細胞群體中；
(i)允許胞外包膜病毒(EEV)從所述宿主細胞釋放；
(j)從上清液收集釋放的EEV；
(k)將釋放的EEV接觸抗原；和
(l)回收第一文庫的編碼在EEV的膜表面上表達并且對于所述抗原具有特異性的免疫
球蛋白重鏈融合多肽的多核苷酸。
3.權利要求2的方法，進一步包括重復步驟(g)-(l)一次或多次，由此富集所述第一文
庫的編碼作為特異性結合所述抗原的免疫球蛋白重鏈融合多肽的部分的免疫球蛋白重鏈
可變區或其抗原特異性片段的多核苷酸。
4.權利要求1的方法，進一步包括分離從所述第一文庫回收的多核苷酸。
5.權利要求1-4任一項的方法，其中第一多肽區段進一步包含重鏈CH2結構域、重鏈CH3
結構域或其組合。
6.權利要求5的方法，其中所述第一多肽區段包含人IgG恒定區或其一部分。
7.權利要求1-4任一項的方法，其中(b)中的一個或多個編碼免疫球蛋白輕鏈的多核苷
酸各自包含在牛痘病毒載體中。
8.權利要求1-4任一項的方法，其中(b)中的一個或多個編碼免疫球蛋白輕鏈的多核苷
酸包含在質粒載體中。
9.一種融合蛋白，包含與以下的N末端融合的免疫球蛋白重鏈可變區結構域：(a)由SEQ
ID NO：11的氨基酸117-421組成的多肽區段，其是與牛痘病毒A56R蛋白的柄區、跨膜結構域
和胞內結構域融合的人IgG1的CH1結構域；或(b)由SEQ ID NO：30的氨基酸117-653組成的
多肽區段，其是與牛痘病毒A56R蛋白的柄區、跨膜結構域和胞內結構域融合的人IgG1的完
整恒定區；其中所述融合蛋白酶可以在牛痘胞外包膜病毒(EEV)的表面表達，其中當所述融
合蛋白與輕鏈可變結構域組合，可以形成功能性抗體或其抗原結合片段。
10.權利要求9的融合蛋白，進一步包含用于促進所述融合蛋白在EEV表面表達的信號
肽。
11.編碼權利要求9或10的融合蛋白的多核苷酸。
12.包含權利要求11的多核苷酸的載體。
13.包含權利要求11的多核苷酸或權利要求12的載體的重組牛痘病毒。
14.用權利要求13的重組牛痘病毒感染的宿主細胞。
15.一種重組牛痘文庫，其包含編碼多個免疫球蛋白重鏈融合多肽的多核苷酸文庫，其
中所述多核苷酸文庫在牛痘病毒載體中構建，且所述文庫中的各多核苷酸包含：(a)編碼包
含重鏈IgG CH1結構域的第一多肽區段的第一多核苷酸，(b)編碼包含牛痘病毒A56R胞外包
膜病毒(EEV)特異性膜蛋白的柄區、跨膜結構域和胞內域的第二多肽區段的第二多核苷酸，
和
(c)編碼位于編碼所述第一多肽區段的所述第一多核苷酸上游的免疫球蛋白重鏈可變
區或其片段的第三多核苷酸；
其中所述免疫球蛋白重鏈融合多肽可以在牛痘EEV表面上表達，且所述免疫球蛋白重
鏈融合多肽可以與免疫球蛋白輕鏈組合以形成免疫球蛋白分子的抗原結合結構域。
16.權利要求15的重組牛痘文庫，其中各免疫球蛋白重鏈融合多肽進一步包含用于促
進所述多個免疫球蛋白重鏈融合多肽在EEV表面上表達的信號肽。
17.權利要求15或16的重組牛痘文庫，其中所述第一多肽區段進一步包含重鏈CH2結構
域、重鏈CH3結構域或其組合。
18.權利要求17的重組牛痘文庫，其中所述第一多肽區段包含人IgG恒定區或其部分。
19.權利要求15的重組牛痘文庫，其通過三分子重組產生。
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