1.一種蟲草金屬硫蛋白的生產方法,其特征在于其具體步驟為:(1)培養蟲草屬真菌菌絲體:將蟲草屬真菌進行試管斜面菌種培養、三角瓶液體種子培養、種子罐培養及發酵罐培養,發酵罐培養步驟的培養基為:每升培養液中葡萄糖10-50g,蛋白胨5-10g,酵母提取物1-10g,硫酸鋅5-20g,pH值為5.0-7.0;發酵罐投料體積60%-80%,接種重量5-10%,溫度20~30℃,通氣1∶0.3~0.8,攪拌轉速80~150rpm,培養至菌絲體收得率大于等于1.2%,培養基還原糖含量小于等于0.2%時,放罐收獲菌絲體;(2)板框過濾:將培養好的蟲草屬真菌菌絲體以板框過濾機過濾,經過板框過濾后取出菌絲體,得到的菌絲體可以用于金屬硫蛋白的提取;(3)研磨使細胞破碎,雜蛋白變性:將上述菌絲體中加入相當于菌絲體重量1.5~3倍的0.05mol/LTris(三羥甲基氨基甲烷)-HCl,pH?8.6,用研磨機研磨、勻漿,至細胞破碎后,加入與菌絲體和Tris(三羥甲基氨基甲烷)-HCl等重量的氯仿和乙醇,氯仿和乙醇的體積比為0.08∶1,變性除雜蛋白,攪拌約5~10min;將細胞破碎液于5000~10000r/min離心,棄沉淀,得上清液;上清液80~90℃熱變性5-10min,沉淀雜蛋白,靜置0.5h以上,8000r/min以上離心棄沉淀,得上清液,為金屬硫蛋白的粗提液;粗提液以截留分子量小于2000的膜超濾濃縮,得濃縮液;(4)柱層析:將上述的金屬硫蛋白的提取液的濃縮液采用葡聚糖凝膠G-50進行柱層析分離,以去離子水洗脫,在254nm檢測洗脫液的吸收峰,吸收峰部分輔助以巰基試劑法監測,收集巰基試劑法監測到的最大吸收峰,即為金屬硫蛋白部分;將柱層析得到的金屬硫蛋白收集液冷凍干燥,得到蟲草金屬硫蛋白凍干粉。2.根據權利要求1所述的一種蟲草金屬硫蛋白的生產方法,其?特征在于所述的試管斜面菌種培養步驟:配制培養基:每升培養液中葡萄糖5-25g,蛋白胨5-10g,酵母提取物1-10g,瓊脂粉10-20g,調pH值為5.0-7.0,分裝于試管中,滅菌,制成斜面;將蟲草菌種在無菌條件下接入試管斜面,15~30℃培養5-10天。3.根據權利要求1所述的一種蟲草金屬硫蛋白的生產方法,其特征在于所述的三角瓶液體種子培養步驟:配制培養基:每升培養液中葡萄糖10-20g,蛋白胨5-10g,酵母提取物1-10g,pH值為5.0-7.0,將配制好的培養基分裝入500ml錐形瓶中,每瓶裝200ml,封口后在120~130℃條件下滅菌18~30分鐘,取出培養基,自然冷卻至20~30℃;在無菌條件下每瓶接入黃豆粒大小的斜面培養物1-2塊,15~30℃,搖床轉速120rpm,培養5天~10天。4.根據權利要求1所述的一種蟲草金屬硫蛋白的生產方法,其特征在于所述的種子罐培養步驟:配制培養基:每升培養液中葡萄糖10-20g,蛋白胨5-10g,酵母提取物1-10g,pH值為5.0-7.0,投料體積60%-80%,分批滅菌,接入培養好的三角瓶液體菌種,接種量2-10%,培養溫度15~30℃,通氣1∶0.5,攪拌轉速120rpm,在種子罐中15~30℃培養2-5天,至以菌絲體干重計量時菌絲體收得率為0.4-0.8%。?
展開