本發明公開了一種pH-區帶精制逆流色譜分離去氫紫堇堿的方法：（1）氯仿、甲醇、水充分振搖后靜置分層，取上相加入終濃度為10～20mM的無機酸作為固定相，下相加入終濃度為10～20mM的堿作為流動相；（2）取元胡的乙醇粗提物用固定相或者固定相和未堿化下相的混合溶液溶解制成樣品溶液；（3）取固定相注滿逆流色譜儀的分離柱，注入樣品溶液，使分離柱正轉，在750～850r/min轉速下，以1.5～2.5ml/min的流速持續注入流動相，收集洗脫液，薄層層析和高效液相進行檢測，合并與去氫紫堇堿標準品R值及保留時間相同且純度大于90%的洗脫液，用旋轉蒸發儀回收溶劑，得到去氫紫堇堿。本發明工藝簡單，回收率高，分離得到的去氫紫堇堿純度高，對元胡藥材的充分利用有重要作用。

1.一種應用pH-區帶精制逆流色譜分離去氫紫堇堿的方法，其特征在于所述的方法包括以下
步驟：
(1)在分液漏斗中分別加入氯仿、甲醇、水以體積比為1.5～3∶1～1.5∶1組成的溶劑體系，
充分振搖后靜置分層，取上相加入終濃度為10～20mM的無機酸作為固定相，下相加入終
濃度為10～20mM的堿作為流動相；
(2)取元胡的乙醇粗提物用固定相溶解，所述的固定相加入量為25～60ml/g元胡的乙醇粗
提物，溶解后制成樣品溶液；所述的元胡的乙醇粗提物按如下方法制得：取元胡藥材粉碎，
用60～98％乙醇回流提取1～5次，合并各次的提取液，抽濾后濾液減壓濃縮至浸膏狀，用
酸溶液捏溶至捏溶液的pH值為2～3，靜置10～30小時，取上清液過濾除去沉淀；濾液用氯
仿萃取1～5次，收集合并氯仿層，合并的氯仿層用質量濃度為1～3％氫氧化鈉溶液萃取，取
氯仿層旋轉蒸發回收氯仿，得元胡的乙醇粗提物；
(3)取固定相注滿逆流色譜儀的分離柱，隨后注入樣品溶液，待進樣完成后，開啟速度控
制器，使分離柱正轉，在750～850r/min轉速下，以1.5～2.5ml/min的流速持續注入流動相，
以波長190～400nm的紫外檢測器檢測，用自動部分收集器收集洗脫液，薄層層析跟蹤檢測
至洗脫液中無去氫紫堇堿組分，停止收集；
(4)將步驟(3)中收集得到的洗脫液通過薄層層析和高效液相進行檢測，合并與去氫紫堇
堿標準品R_f值及保留時間相同且去氫紫堇堿純度大于90％的洗脫液，用旋轉蒸發儀回收溶
劑，得到去氫紫堇堿。
2.如權利要求1所述的應用pH-區帶精制逆流色譜分離去氫紫堇堿的方法，其特征在于所述
的方法包括以下步驟：
(1)在分液漏斗中分別加入氯仿、甲醇、水以體積比為1.5～3∶1～1.5∶1組成的溶劑體系，
充分振搖后靜置分層，取上相加入終濃度為10～20mM的無機酸作為固定相，下相加入終
濃度為10～20mM的堿作為流動相；
(2)取元胡的乙醇粗提物用固定相和未堿化的下相溶解，所述的固定相加入量為25～
60ml/g元胡的乙醇粗提物，所述的未堿化的下相加入量為0～50ml/g元胡的乙醇粗提物，溶
解后制成樣品溶液；
(3)取固定相注滿逆流色譜儀的分離柱，隨后注入樣品溶液，待進樣完成后，開啟速度控
制器，使分離柱正轉，在750～850r/min轉速下，以1.5～2.5ml/min的流速持續注入流動相，
以波長190～400nm的紫外檢測器檢測，用自動部分收集器收集洗脫液，TLC跟蹤檢測至洗
脫液中無去氫紫堇堿組分，停止收集；
(4)將步驟(3)中收集得到的洗脫液通過薄層層析和高效液相進行檢測，合并與去氫紫堇
堿標準品R_f值及保留時間相同且去氫紫堇堿純度大于90％的洗脫液，用旋轉蒸發儀回收溶
劑，得到去氫紫堇堿。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述的酸溶液為質量濃度為1～2％的鹽酸水溶液
或1～2％的硫酸水溶液。
4.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述步驟(3)中，所述樣品溶液的進樣的體
積小于分離柱柱體積的30％。
5.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述步驟(1)中所述的溶劑體系中氯仿、甲
醇和水的體積比為2∶1∶1。
6.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述步驟(1)中，所述的無機酸為鹽酸。
7.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述步驟(1)中，所述的堿為三乙胺。
8.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述步驟(3)中，所述注入樣品溶液可以通
過進樣圈注入樣品溶液或通過泵泵入樣品溶液。
9.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于步驟(4)所述的高效液相色譜的檢測條件為：
YMC?ODS?C₁₈?column?4.6×250mm，5μm；柱溫：30℃；流動相：乙腈-0.03mol/L磷酸二氫
鈉水溶液以體積比32∶68混合的溶液，等度洗脫；流速：0.6ml/min；檢測波長：345nm；進
樣量：20μl。