本發明涉及檢測用品領域內的一種油菜轉基因檢測試劑盒，由引物組合和膜芯片組成，其特征在于引物組合為11重雙啟動寡核苷酸引物組合，膜芯片為順序固定在支持膜表面的11組探針序列和一組陽性對照探針序列，各探針的5’端做氨基標志；引物組合中有非對稱PCR擴增引物，為5’端帶生物素標志的Tag引物。本發明克服了現有技術費時費力成本高的缺陷，提供的油菜轉基因檢測試劑盒操作簡單，快速靈敏，檢測通量大，檢測結果可視化，成本低廉。

1.一種油菜轉基因檢測試劑盒，由引物組合和膜芯片組成，其特征在于引物組合為11重雙啟動寡核苷酸引物組合，各對引物的堿基序列5’-3’如下，其中堿基I為次黃嘌呤核苷酸：EPSPS：正向引物：?CTTTCTGGAACCGTCCGTATIIIIIGTGACAA反向引物：CCAAGTATCACCTTCCTTACIIIIICTGGCAC；GOX：正向引物：CTGCTGCTCCTAACTGGAAGIIIIITCACGTT反向引物：GGTCATTGGAGCACCAGTCAIIIIIAGGTGAC；PAT：正向引物：?TGAGACGTCTACAGTGAACTIIIIIACAGAGC反向引物：CTTCCAGGGCCCAGCGTAAGIIIIICCAGCCA；NPTII：正向引物：?CGAAGTGCCGGGGCAGGATCIIIIITCATCTC反向引物：CGCGAGCCCCTGATGCTCTTIIIIIAGATCAT；BAR：正向引物：?GACGACCTCGTCCGTCTGCGIIIIIGCTATCC反向引物：CAGCAGGTGGGTGTAGAGCGIIIIICCCAGTC；BARNASE：正向引物：?ATTATCGTGGATTTCCGTTTIIIIICTGGTGC反向引物：GCTTATGATATGTCTGAAGAIIIIICGCAACC；BARSTAR：正向引物：?CCTGGACGCTTTATGGGATTIIIIIACCGGAT反向引物：TTCCGCTTTCGCTTCACGGAIIIIITGAAGCA；FMV35S：正向引物：?GGAAGAATTCTCAGTCCAAAIIIIIAACAAGG反向引物：?CAAAGATGCCCACTAACTTTIIIIITTCGGTG；CaMV35S：正向引物：GATAAAGGAAAGGCCATCGTIIIIIATGCCTC反向引物：TGGGATTGTGCGTCATCCCTIIIIICAGTGGA；NOS?3’：正向引物：?TTAAGATTGAATCCTGTTGCIIIIITTGCGAT反向引物：CGCGCGCGATAATTTATCCTIIIIIGCGCGCT；PEP：正向引物：?ATACGCTACAACTACCAATAIIIIICGAGTGG反向引物：GGAAAAAAGGTCGAGAAGTTIIIIICACGAGG；膜芯片為順序固定在支持膜表面的11組探針序列和一組陽性對照（Positive）探針序列，11組探針序列和陽性對照探針序列的堿基序列5’-3’如下，各探針的5’端做氨基標志：EPSPS探針:?NH₂-5’-TATCACCGGTCTTTTGGAAGGTGAAGATGTTATCAACACTGGTAAGGCTATGCAAGCTA-3’；GOX探針:?NH₂-5’-CCCTTCCAGTGATTGGTCGTGCTACCCGTACTCCAGACGTTATCTACGCTTTCGGTCAC-3’；PAT探針:?NH₂-5’-GGATTGATGATCTAGAGAGGTTGCAAGATAGATACCCTTGGTTGGTTGCTGAGGTTGAG-3’；NPTII探針:?NH₂-5’-CACCAAGCGAAACATCGCATCGAGCGAGCACGTACTCGGATGGAAGCCGGTCTTGTCGA-3’；BAR探針:?NH₂-5’-CGCAACGCCTACGACTGGACGGCCGAGTCGACCGTGTACGTCTCCCCCCGCCACCAGCG-3’；BARNASE探針:?NH₂-5’-AACGGAAACATCTTCTCACAAGGCACACACAGAAGCACAGGTTATCAACACGTTTGACG-3’；BARSTAR探針:?NH₂-5’-CGTTTTGGAATGGAGGCAGTTTGAACAAAGCAAGCAGCTGACTGAAAATGGCGCCGAGA-3’；FMV35S探針:?NH₂-5’-CAAAGTAAACTACTGTTCCAGCACATGCATCATGGTCAGTAAGTTTCAGAAAAAGACAT-3’；CaMV35S探針:?NH₂-5’-AGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATG-3’；NOS?3’探針:?NH₂-5’-ATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAAAA-3’；PEP探針:?NH₂-5’-GAGATTTTTCCAAGGCTTCAAACTCTTTCATCACATGTCTCTTCTCTTTCCATTGTCTT-3’；Positive探針:?NH₂-5’-TAGCAAGGATGAGTATTCGAACAGTTAGAGGCAGTCAGGGAGAATCACTACGTACAAGC-3’；所述引物組合中有非對稱PCR擴增引物，為5’端帶生物素標志的Tag引物，其堿基順序如下所示：Tag引物：biotin-5’-GACGGACACCTACCCATATCACCCTTGACG-3’。2.根據權利要求1所述的油菜轉基因檢測試劑盒，其特征在于所述油菜轉基因檢測試劑盒由引物組合、膜芯片和輔料組成，輔料為脫氧核糖核苷三磷酸、EX-Taq聚合酶和5’端帶生物素標志的陽性寡核苷酸單鏈DNA，5’端帶生物素標志的陽性寡核苷酸單鏈DNA的堿基順序為biotin-5'-?GCTTGTACGTAGTGATTCTCCCTGACTGCCTCTAACTGTTCGAATACTCATCCTTGCTA-3’。3.根據權利要求1所述的油菜轉基因檢測試劑盒，其特征在于所述油菜轉基因檢測試劑盒由引物組合、膜芯片、輔料和配液組成，配液為10×PCR緩沖液、預雜交液、雜交液、洗液、封閉液、鏈酶親和素標記辣根過氧化物酶和四甲基聯苯胺顯色液。4.根據權利要求3所述的油菜轉基因檢測試劑盒，其特征在于所述預雜交液為5×SSC，0.1%重量百分比十二烷基磺酸鈉和10×Denhardt’s液；雜交液為5×SSC，0.1%?重量百分比SDS，5×Denhardt’s，50%重量百分比去離子甲酰胺和100ug/ml?酵母tRNA；洗液分別為洗液1：2×SSC和0.1%?重量百分比SDS，洗液2：0.5×SSC和0.1%重量百分比?SDS，洗液3：100?mM?Tris-HCl，pH7.5，150?mM?NaCl，洗液4：100?mM?Tris-HCl，pH9.5，100?mM?NaCl和100?mM?MgCl₂；封閉液為3%重量百分比牛血清白蛋白，100?mM?Tris-HCl，pH7.5，150?mM?NaCl；四甲基聯苯胺顯色液分別為四甲基聯苯胺顯色液A液：200mM檸檬酸鈉pH5.4，0.2mg/ml四甲基聯苯胺，四甲基聯苯胺顯色液B液：?3%重量百分比的H₂O₂用800體積的雙蒸水稀釋液，使用前A液B液等量混合配成四甲基聯苯胺顯色液。5.根據權利要求1所述的油菜轉基因檢測試劑盒，其特征在于所述支持膜為硝酸纖維素膜或尼龍膜。