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一種H9亞型禽流感病毒檢測試劑盒及其應(yīng)用

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-12-08
  • 技術(shù)成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN201010598148.1 
  • 技術(shù)(專利)名稱 一種H9亞型禽流感病毒檢測試劑盒及其應(yīng)用 
  • 項目單位 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
  • 發(fā)明人 吳文學(xué),蔣菲,黃書林,張躍偉 
  • 行業(yè)類別 中藥材獲取-非動植物采選
  • 技術(shù)成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 吳極
  • 發(fā)布時間 2021-12-08  
  • 01

    項目簡介

    本發(fā)明公開了一種H9亞型禽流感病毒檢測試劑盒及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的試劑盒,包括三對引物,即與H9亞型禽流感病毒的HA基因結(jié)合的內(nèi)側(cè)引物對、外側(cè)引物對和環(huán)形引物對。本發(fā)明的H9亞型禽流感病毒檢測試劑盒,檢測靈敏度高,最低可檢測出10EID的病毒,操作簡單方便,特別適于基層現(xiàn)場進行的臨床醫(yī)學(xué)檢測及食品中可能污染的H9亞型禽流感病毒的檢測。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種檢測H9亞型禽流感病毒的專用引物,由以下三對環(huán)介導(dǎo)等溫擴增所用引
    物組成;一對引物是與H9亞型禽流感病毒的HA基因結(jié)合的內(nèi)側(cè)引物對,一對引物是
    與H9亞型禽流感病毒的HA基因結(jié)合的外側(cè)引物對,一對引物是與H9亞型禽流感病
    毒的HA基因結(jié)合的環(huán)形引物對;所述HA基因如GenBank?Accession?Number?EU644482
    中所示;
    所述內(nèi)側(cè)引物對由上游引物FIP和下游引物BIP組成,所述上游引物FIP的核苷
    酸序列是序列表中的序列4,所述下游引物BIP的核苷酸序列是序列表中的序列5;所
    述外側(cè)引物對由上游引物F3和下游引物B3組成,所述上游引物F3的核苷酸序列是
    序列表中的序列2,所述下游引物B3的核苷酸序列是序列表中的序列3;所述環(huán)形引
    物對由上游引物L(fēng)F和下游引物L(fēng)B組成,所述上游引物L(fēng)F的核苷酸序列是序列表中
    的序列6,所述下游引物L(fēng)B的核苷酸序列是序列表中的序列7。
    2.權(quán)利要求1所述的專用引物在制備試劑盒中的應(yīng)用;所述試劑盒用于輔助鑒定
    H9亞型禽流感病毒和/或檢測待測樣本是否含有H9亞型禽流感病毒。
    3.一種含有權(quán)利要求1所述的專用引物的試劑盒;所述試劑盒用于輔助鑒定H9
    亞型禽流感病毒和/或檢測待測樣本是否含有H9亞型禽流感病毒。
    4.如權(quán)利要求3所述的試劑盒,其特征在于:所述試劑盒包括溶液A;所述溶液
    A是將溶質(zhì)溶于水得到的;所述溶質(zhì)及其濃度如下:KCl為16.67nmol/μl,MgSO4·7H2O
    為13.33nmol/μl,(NH4)2SO4為16.67nmol/μl,鈣黃綠素為0.083nmol/μl,MnCl2·4H2O
    為1nmol/μl,dNTPs各2.33nmol/μl,甜菜堿為0.33μmol/μl,Tris-HCl為33.33nmol/μl,
    Tween-20為0.17%(體積百分含量),所述上游引物F3為0.28-0.39pmol/μl,所述下游
    引物B3為0.28-0.39pmol/μl,所述上游引物FIP為2.22-3.11pmol/μl,所述下游引物BIP
    為2.22-3.11pmol/μl,所述上游引物L(fēng)F為1.11-1.55pmol/μl,所述下游引物L(fēng)B為
    1.11-1.55pmol/μl。
    5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒,其特征在于:所述溶液A中,所述上游引物F3
    為0.33pmol/μl,所述下游引物B3為0.33pmol/μl,所述上游引物FIP為2.67pmol/μl,
    所述下游引物BIP為2.67pmol/μl,所述上游引物L(fēng)F為1.33pmol/μl,所述下游引物
    LB為1.33pmol/μl。
    6.如權(quán)利要求3或4或5所述的試劑盒,其特征在于:所述試劑盒還包括溶液B;
    所述溶液B由溶劑和溶質(zhì)組成;所述溶劑為水;所述溶質(zhì)及其濃度如下:Bst?DNA聚
    合酶為7.52U/μl,AMV反轉(zhuǎn)錄酶為0.6U/μl。
    7.一種檢測來自死亡動物的樣品中是否攜帶H9亞型禽流感病毒的方法,是用權(quán)
    利要求1所述專用引物對來自死亡動物的樣品的總RNA進行反轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫擴增
    反應(yīng),檢測擴增產(chǎn)物,確定來自死亡動物的樣品中是否攜帶H9亞型禽流感病毒;所
    述環(huán)介導(dǎo)等溫擴增反應(yīng)的條件為:60-65℃、60-90分鐘。
    展開

專利技術(shù)附圖

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