本發(fā)明公開了一種H9亞型禽流感病毒檢測試劑盒及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的試劑盒，包括三對引物，即與H9亞型禽流感病毒的HA基因結(jié)合的內(nèi)側(cè)引物對、外側(cè)引物對和環(huán)形引物對。本發(fā)明的H9亞型禽流感病毒檢測試劑盒，檢測靈敏度高，最低可檢測出10EID的病毒，操作簡單方便，特別適于基層現(xiàn)場進行的臨床醫(yī)學(xué)檢測及食品中可能污染的H9亞型禽流感病毒的檢測。

1.一種檢測H9亞型禽流感病毒的專用引物，由以下三對環(huán)介導(dǎo)等溫擴增所用引
物組成；一對引物是與H9亞型禽流感病毒的HA基因結(jié)合的內(nèi)側(cè)引物對，一對引物是
與H9亞型禽流感病毒的HA基因結(jié)合的外側(cè)引物對，一對引物是與H9亞型禽流感病
毒的HA基因結(jié)合的環(huán)形引物對；所述HA基因如GenBank?Accession?Number?EU644482
中所示；
所述內(nèi)側(cè)引物對由上游引物FIP和下游引物BIP組成，所述上游引物FIP的核苷
酸序列是序列表中的序列4，所述下游引物BIP的核苷酸序列是序列表中的序列5；所
述外側(cè)引物對由上游引物F3和下游引物B3組成，所述上游引物F3的核苷酸序列是
序列表中的序列2，所述下游引物B3的核苷酸序列是序列表中的序列3；所述環(huán)形引
物對由上游引物L(fēng)F和下游引物L(fēng)B組成，所述上游引物L(fēng)F的核苷酸序列是序列表中
的序列6，所述下游引物L(fēng)B的核苷酸序列是序列表中的序列7。
2.權(quán)利要求1所述的專用引物在制備試劑盒中的應(yīng)用；所述試劑盒用于輔助鑒定
H9亞型禽流感病毒和/或檢測待測樣本是否含有H9亞型禽流感病毒。
3.一種含有權(quán)利要求1所述的專用引物的試劑盒；所述試劑盒用于輔助鑒定H9
亞型禽流感病毒和/或檢測待測樣本是否含有H9亞型禽流感病毒。
4.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括溶液A；所述溶液
A是將溶質(zhì)溶于水得到的；所述溶質(zhì)及其濃度如下：KCl為16.67nmol/μl，MgSO₄·7H₂O
為13.33nmol/μl，(NH₄)₂SO₄為16.67nmol/μl，鈣黃綠素為0.083nmol/μl，MnCl₂·4H₂O
為1nmol/μl，dNTPs各2.33nmol/μl，甜菜堿為0.33μmol/μl，Tris-HCl為33.33nmol/μl，
Tween-20為0.17％(體積百分含量)，所述上游引物F3為0.28-0.39pmol/μl，所述下游
引物B3為0.28-0.39pmol/μl，所述上游引物FIP為2.22-3.11pmol/μl，所述下游引物BIP
為2.22-3.11pmol/μl，所述上游引物L(fēng)F為1.11-1.55pmol/μl，所述下游引物L(fēng)B為
1.11-1.55pmol/μl。
5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于：所述溶液A中，所述上游引物F3
為0.33pmol/μl，所述下游引物B3為0.33pmol/μl，所述上游引物FIP為2.67pmol/μl，
所述下游引物BIP為2.67pmol/μl，所述上游引物L(fēng)F為1.33pmol/μl，所述下游引物
LB為1.33pmol/μl。
6.如權(quán)利要求3或4或5所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括溶液B；
所述溶液B由溶劑和溶質(zhì)組成；所述溶劑為水；所述溶質(zhì)及其濃度如下：Bst?DNA聚
合酶為7.52U/μl，AMV反轉(zhuǎn)錄酶為0.6U/μl。
7.一種檢測來自死亡動物的樣品中是否攜帶H9亞型禽流感病毒的方法，是用權(quán)
利要求1所述專用引物對來自死亡動物的樣品的總RNA進行反轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)等溫擴增
反應(yīng)，檢測擴增產(chǎn)物，確定來自死亡動物的樣品中是否攜帶H9亞型禽流感病毒；所
述環(huán)介導(dǎo)等溫擴增反應(yīng)的條件為：60-65℃、60-90分鐘。