本發明涉及生物檢測技術領域，具體涉及一種利用多重熒光PCR法對登革熱、基孔肯亞和黃熱病毒在單管同時進行檢測的引物、探針及試劑盒。本發明的登革熱、基孔肯亞和黃熱病毒多重熒光PCR檢測用引物及探針，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1-9所示；登革熱、基孔肯亞和黃熱病毒多重PCR檢測試劑盒，包括多重熒光PCR檢測混合液，所述多重熒光PCR檢測混合液中含有前述的引物和探針。利用本發明的試劑盒和引物探針能快速檢測登革熱病毒、基孔肯亞病毒和黃熱病毒，具有操作簡便、靈敏度高、特異性好等優點；及時發現和確診可疑病例，提高對該類疾病的監測水平。

1.一種登革熱、基孔肯亞和黃熱病毒的多重熒光PCR檢測用引物及探針，其特征在于，所述引物和探針的組成如下：登革熱病毒上游引物：5’-TGGGAGAGACCAGAGATCCTG-3’登革熱病毒下游引物：5’-ATTCAACAGCACCATTCCATTTTC-3’登革熱病毒探針：5’-熒光報告基團-TCTCTACAGCATCATT-熒光淬滅基團-3’基孔肯亞病毒上游引物：5’-ACGAGGCAAGTTGTCTATTATGAG-3’基孔肯亞病毒下游引物：5’-GGTAGAGCGTTGACCCTACTG-3’基孔肯亞病毒探針：5’-熒光報告基團-AACAGCACACGGTCGCACGGTT-熒光淬滅基團-3’黃熱病毒上游引物：5’-TGCTAAGCTGTGAGGCAGTG-3’黃熱病毒下游引物：5’-CTAGACCCCGTCTTTCTACCAC-3’黃熱病毒探針：5’-熒光報告基團-ACAGCCGACCTCCAGGTTGCGA-熒光淬滅基團-3’所述登革熱病毒探針標記的熒光報告基團為FAM熒光基團，基孔肯亞病毒探針標記的熒光報告基團為HEX熒光基團，黃熱病毒探針標記的熒光報告基團為Cal?Red?610熒光基團；所述熒光淬滅基團為BHQ1。2.一種登革熱、基孔肯亞和黃熱病毒多重PCR檢測試劑盒，包含多重熒光PCR檢測混合液，所述多重熒光PCR檢測混合液中含有權利要求1所述的引物和探針。3.如權利要求2所述的多重PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述多重熒光PCR檢測混合液還含有RT-PCR?MIX和H₂O。4.如權利要求2所述的多重PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述多重熒光PCR檢測混合液的組成為：登革熱病毒上游引物0.5μl/test；登革熱病毒下游引物0.5μl/test；登革熱病毒探針0.1μl/test；基孔肯亞病毒上游引物0.5μl/test；基孔肯亞病毒下游引物0.5μl/test；基孔肯亞病毒探針0.1μl/test；黃熱病毒上游引物0.5μl/test；黃熱病毒下游引物0.5μl/test；黃熱病毒探針0.1μl/test；RT-PCR?MIX?12.5μl/test；雙蒸水3.2μl/test。5.如權利要求2所述的多重PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述多重PCR檢測試劑盒還含有RT-PCR酶、陰性對照品及陽性對照品中的至少一種。6.如權利要求5所述的多重PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述陽性對照包括含有SEQ?ID?NO:10所示目的擴增序列的登革熱病毒質粒，含有SEQ?ID?NO:11所示目的擴增序列的基孔肯亞病毒質粒，以及含有SEQ?ID?NO:12所示目的擴增序列的黃熱病毒質粒；所述陰性對照為DEPC-H₂O。7.如權利要求5所述的多重PCR檢測試劑盒，其特征在于，登革熱、基孔肯亞和黃熱病毒檢測試劑盒熒光PCR法的PCR檢測體系如下：多重熒光PCR檢測混合液??19μlRT-PCR酶???????????????1μl待測品?????????????????5μl反應總體系為25μl。8.如權利要求7所述的多重PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述待測品為樣本核酸提取液、陽性對照品或陰性對照品。9.權利要求1所述登革熱、基孔肯亞和黃熱病毒的多重熒光PCR檢測用引物及探針，權利要求2-8任一權利要求所述登革熱、基孔肯亞和黃熱病毒多重PCR檢測試劑盒在制備登革熱、基孔肯亞病和/或黃熱病檢測試劑中的應用。