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豬瘟病毒核酸定量檢測試劑盒、檢測方法、引物及其探針

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-21
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201110336911.8 
  • 技術(專利)名稱 豬瘟病毒核酸定量檢測試劑盒、檢測方法、引物及其探針 
  • 項目單位 武漢大學
  • 發明人 胡萌,王業富,周康平,邱楊,劉建麗 
  • 行業類別 中藥材獲取-動植物采集
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 李文宏
  • 發布時間 2021-12-21  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種豬瘟病毒核酸定量檢測試劑盒、檢測方法、引物及其探針,屬于生物技術領域。本發明試劑盒包括PCR反應液,其中包括DEPC處理水、Taq酶、M-MLV反轉錄酶、RNase抑制劑、dNTPMix、10×一步法RT-PCRBuffer、MgCl溶液、豬瘟病毒正向引物:5'-AACGGYAGTGCTTTCTAYC-3'、豬瘟病毒反向引物:5'-GTGGRAAAGGCTTCTCTC-3'、豬瘟病毒LNA探針5'-accActTctGtyCtca-3';試劑盒中還包括RNA提取液、陰性質控品、工作標準品、陽性質控品和臨界陽性質控品。本發明采用實時熒光定量PCR技術定量檢測豬瘟病毒核酸,具有特異、靈敏、快速、操作簡便的優點。
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  • 02

    說明書

    1.一種豬瘟病毒核酸定量檢測引物和探針,包括如下的序列組:?1)包括下述正向引物,反向引物和熒光探針的一組序列:?正向引物:5′-AACGGYAGTGCTTTCTAYC-3′,?反向引物:5′-GTGGRAAAGGCTTCTCTC-3′,?熒光探針:5′-ACCACTTCTGTYCTCA-3′,其中下標為LNA修飾;?其中,所述序列中Y為C或T,R為A或G。?2.根據權利要求1中所述的引物和探針,其特征在于,其中熒光探針的5’端修飾的熒光染料選自:FAM,HEX,TET,JOE,VIC,ROX,Cy3或Cy5;3’端修飾的熒光染料選自:TAMRA、Eclipse,BHQ1,BHQ2,BHQ3或DABCYL。?3.含有權利要求1或2所述引物和探針的豬瘟病毒核酸定量檢測試劑盒。?4.根據權利要求3所述的試劑盒,其特征在于,該試劑盒還包括以下試劑中的一種或多種:?(1)PCR反應液;?(2)RNA提取液;?(3)陰性質控品,為不含豬瘟病毒E2基因的PSG-TS載體質粒DNA片段;?(4)陽性質控品,為含1.0×106copy/ml豬瘟病毒基因組DNA片段;?(5)臨界陽性質控品,為含1.0×104copy/ml豬瘟病毒基因組DNA片段;?(6)工作標準品。?5.根據權利要求4所述的試劑盒,其特征在于,其中,(1)PCR反應液,包括DEPC處理水、具有5’→3’外切活性的HotStart?Taq?DNA聚合酶、M-MLV反轉錄酶、RNase抑制劑、dNTP?Mix、10×PCR?Buffer、MgCl2溶液,所述引物及探針溶于PCR反應液中。?6.根據權利要求4所述的試劑盒,其特征在于,所述RNA提取液分為溶液1,溶液2,溶液3,溶液4及溶液5,其中溶液1為Trizol試劑,溶液2為氯仿,溶液3為異丙醇,溶液4為75%乙醇,溶液5為DEPC處理水。?7.根據權利要求4所述的試劑盒,其特征在于,所述工作標準品包括:?a、工作標準品1,含有1.Ox107copy/ml的豬瘟病毒E2基因的非傳染性DNA?片段;?b、工作標準品2,含有1.O×106copy/ml的豬瘟病毒E2基因的非傳染性DNA片段;?c、工作標準品3,含有1.O×105copy/ml的豬瘟病毒E2基因的非傳染性DNA片段;?d、工作標準品4,含有1.O×104copy/ml的豬瘟病毒E2基因的非傳染性DNA片段。?8.根據權利要求5所述的試劑盒,其特征在于,所述PCR反應液各組分含量的配比為:DEPC處理水23.1μl;5U/μl的熱啟動Taq酶0.4μl;200U/μlM-MLV反轉錄酶1μl;Rnase抑制劑0.5μl;10mmol/1的dNTP?Mix2μl;10×一步法RT-PCR?Buffer5μl;25mmol/1的MgCl2溶液用量9μl;10μmol/l的豬瘟病毒正向引物用量1.5μl;濃度為10μmol/l的豬瘟病毒反向引物用量1.5μl;濃度為10μmol/l的豬瘟病毒探針用量1μl。?
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