本發明公開了一種豬瘟病毒核酸定量檢測試劑盒、檢測方法、引物及其探針，屬于生物技術領域。本發明試劑盒包括PCR反應液，其中包括DEPC處理水、Taq酶、M-MLV反轉錄酶、RNase抑制劑、dNTPMix、10×一步法RT-PCRBuffer、MgCl溶液、豬瘟病毒正向引物：5'-AACGGYAGTGCTTTCTAYC-3'、豬瘟病毒反向引物：5'-GTGGRAAAGGCTTCTCTC-3'、豬瘟病毒LNA探針5'-accActTctGtyCtca-3'；試劑盒中還包括RNA提取液、陰性質控品、工作標準品、陽性質控品和臨界陽性質控品。本發明采用實時熒光定量PCR技術定量檢測豬瘟病毒核酸，具有特異、靈敏、快速、操作簡便的優點。

1.一種豬瘟病毒核酸定量檢測引物和探針，包括如下的序列組：?1)包括下述正向引物，反向引物和熒光探針的一組序列：?正向引物：5′-AACGGYAGTGCTTTCTAYC-3′，?反向引物：5′-GTGGRAAAGGCTTCTCTC-3′，?熒光探針：5′-ACCACTTCTGTYCTCA-3′，其中下標為LNA修飾；?其中，所述序列中Y為C或T，R為A或G。?2.根據權利要求1中所述的引物和探針，其特征在于，其中熒光探針的5’端修飾的熒光染料選自：FAM，HEX，TET，JOE，VIC，ROX，Cy3或Cy5；3’端修飾的熒光染料選自：TAMRA、Eclipse，BHQ1，BHQ2，BHQ3或DABCYL。?3.含有權利要求1或2所述引物和探針的豬瘟病毒核酸定量檢測試劑盒。?4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，該試劑盒還包括以下試劑中的一種或多種：?(1)PCR反應液；?(2)RNA提取液；?(3)陰性質控品，為不含豬瘟病毒E2基因的PSG-TS載體質粒DNA片段；?(4)陽性質控品，為含1.0×10⁶copy／ml豬瘟病毒基因組DNA片段；?(5)臨界陽性質控品，為含1.0×10⁴copy／ml豬瘟病毒基因組DNA片段；?(6)工作標準品。?5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，其中，(1)PCR反應液，包括DEPC處理水、具有5’→3’外切活性的HotStart?Taq?DNA聚合酶、M-MLV反轉錄酶、RNase抑制劑、dNTP?Mix、10×PCR?Buffer、MgCl₂溶液，所述引物及探針溶于PCR反應液中。?6.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述RNA提取液分為溶液1，溶液2，溶液3，溶液4及溶液5，其中溶液1為Trizol試劑，溶液2為氯仿，溶液3為異丙醇，溶液4為75％乙醇，溶液5為DEPC處理水。?7.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述工作標準品包括：?a、工作標準品1，含有1.Ox10⁷copy／ml的豬瘟病毒E2基因的非傳染性DNA?片段；?b、工作標準品2，含有1.O×10⁶copy／ml的豬瘟病毒E2基因的非傳染性DNA片段；?c、工作標準品3，含有1.O×10⁵copy／ml的豬瘟病毒E2基因的非傳染性DNA片段；?d、工作標準品4，含有1.O×10⁴copy／ml的豬瘟病毒E2基因的非傳染性DNA片段。?8.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR反應液各組分含量的配比為：DEPC處理水23.1μl；5U／μl的熱啟動Taq酶0.4μl；200U／μlM-MLV反轉錄酶1μl；Rnase抑制劑0.5μl；10mmol／1的dNTP?Mix2μl；10×一步法RT-PCR?Buffer5μl；25mmol／1的MgCl₂溶液用量9μl；10μmol／l的豬瘟病毒正向引物用量1.5μl；濃度為10μmol／l的豬瘟病毒反向引物用量1.5μl；濃度為10μmol／l的豬瘟病毒探針用量1μl。?