本發明涉及一種用于檢測棘阿米巴原蟲的環介導等溫擴增引物及試劑盒，其引物序列分別為SEQ ID NO：1-4。本發明根據棘阿米巴基因保守區序列設計的環介導等溫擴增引物能夠靈敏、快速、安全的檢測棘阿米巴原蟲，同時本發明的試劑盒中采用UNG酶能徹底消除多次檢測過程中核酸污染導致的假陽性，解決了限制環介導等溫擴增技術廣泛應用的易被污染干擾的問題。使用本發明的試劑盒在3小時內就可完成阿米巴性角膜炎中阿米巴原蟲的檢測，檢測過程無需昂貴的儀器設備，僅需有水浴鍋或金屬浴和離心機即可；而且檢測結果非常容易判別；與已有檢測技術相比，本發明的試劑盒成本低，整個過程不涉及有毒試劑，對操作人員和環境都非常安全，并且檢測靈敏度極高。

1.一種用于檢測棘阿米巴原蟲的環介導等溫擴增引物，其引物序列分別
為SEQ?ID?NO：1～4。
2.一種棘阿米巴原蟲環介導等溫擴增檢測試劑盒，包括如下組分：
1)DNA提取裂解液；
提取裂解液為STEN裂解液，STEN裂解液是由以下組份組成：10％的十
二烷基硫酸鈉，1～10份；100mM?pH值為8.0的三羥甲基氨基甲烷，1
～10份；10mM的乙二胺四乙酸二鈉，1～10份；1M?氯化鈉，1～10份
；雙蒸水定容到100份；
2)蛋白酶K，內裝20mg/mL蛋白酶K；
3)蛋白抽提液，為體積比為25：24：1的酚：氯仿：異戊醇；
4)核酸沉淀液，為無水乙醇；
5)核酸洗滌液，為70％的乙醇；
6)純水，為滅菌純水；
7)UNG酶，為尿嘧啶DNA糖基化酶；
8)環介導等溫擴增反應液，反應液由以下組份組成：?dATP、dGTP和
dCTP?各1.0～2.0mM，dTTP、dUTP各0.5～1.5mM，Tris-HCl?10～40
mM，KCl?5～20mM，(NH₄)₂SO₄?5～15mM，Triton?X-100?0.05％～
1.0％，MgSO₄?4～12mM，Betaine?0.8～1.6M；
9)引物混合液，內裝序列分別為SEQ?ID?NO：1-4的等溫擴增正反向
內引物和正反向外引物；
10)Bst?DNA聚合酶，內裝8U/μL的Bst?DNA聚合酶；
11)顯色劑，內裝核酸染料GeneFinder^TM。
3.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于上述的試劑盒還包括有陽性對
照核酸，所述的陽性對照核酸為棘阿米巴原蟲陽性DNA。
4.權利要求2或3所述的試劑盒用于水體、食物中棘阿米巴原蟲的檢測。