本發明公開了一種檢測副豬嗜血桿菌的可視化環介導等溫擴增試劑盒。本發明提供的試劑盒，包括環介導等溫擴增反應液、熒光顯色劑、陽性對照和陰性對照，陽性對照為副豬嗜血桿菌DNA，陰性對照為蒸餾水。其中環介導等溫擴增反應液包括3對引物，即參照副豬嗜血桿菌肽聚糖相關脂蛋白基因（palA）的保守區設計了內側引物對、外側引物對和環形引物對。本發明的試劑盒，檢測靈敏度高，最低限度可檢出0.04pg的基因組DNA，操作簡單方便，特別適于基層現場進行的病原檢測及可能污染的動物食品中副豬嗜血桿菌的檢測。

1.一種檢測副豬嗜血桿菌的可視化環介導等溫擴增試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括環介導等溫擴增反應液、陽性對照和陰性對照；所述陽性對照為副豬嗜血桿菌DNA；所述陰性對照為蒸餾水；所述環介導等溫擴增反應液中包括三對引物；一對引物是內側引物對FIP和BIP，一對引物是外側引物對F3和B3，一對引物是環形引物對LF和LB；其中各引物的序列分別為：FIP：TTAACTGCGTCAGCACGACGGATGAGCGTGGTACTCCABIP：GCAACGTGGCAACAGTTTCTAGTAATCAGCTTCTGAGTGACF3：AGTAACTGTTGCAGGTCACB3：TGTGTCTTAGTACTCTAACACTGLF：TGACCTAAGGCGATGTTGTACTCLB：CGGTGAAGAAAAACCAGCAGTAT??。2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述環介導等溫擴增反應液為含有如下溶質的水溶液：Tris-HCl、KCl、(NH₄)₂SO₄、MgSO₄、Triton?X-100、甜菜堿、dNTP、Bst?DNA大片斷聚合酶，外側引物對，內側引物對和環形引物對。3.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：每23μL所述環介導等溫擴增反應液中，各組分的物質的量如下：0.5?μL?1.0?mol/L?Tris-HCl、0.5?μL?0.5?mol/L?KCl、0.5?μL?0.5?mol/L?(NH₄)₂SO₄、5-7?μL?20?mmol/L?MgSO₄、0.1%（v/v）Triton?X-100、2-3?μL?18?mmol/L甜菜堿、2.5?μL?2.5?mmol/L?dNTP、1?μL?8U/μL?Bst?DNA?大片斷聚合酶、1.6?μL?25?μmol/L?FIP、1.6?μL?25?μmol/L?BIP、0.4?μL?25?μmol/L?F3、0.4?μL?25?μmol/L?B3、0.8?μL?25?μmol/L?LF、0.8?μL?25?μmol/L?LB。4.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括熒光顯色劑。5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于：所述熒光顯色劑為熒光染料SYBR?Green?I。6.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于所述環介導等溫擴增反應液與熒光顯色劑的體積比為23:2-5。7.一種應用權利要求1所述的試劑盒來檢測死亡動物中是否攜帶副豬嗜血桿菌的方法，其特征在于應用所述的試劑盒對來自死亡動物的樣品的總DNA進行環介導等溫擴增反應，檢測擴增產物，確定死亡動物中是否攜帶副豬嗜血桿菌；所述環介導等溫擴增反應的條件為：55-60℃、30-60min。8.如權利要求7所述的檢測死亡動物中是否攜帶副豬嗜血桿菌的方法，其特征在于：所述方法中還包括將進行完所述環介導等溫擴增反應的樣本在80℃再反應5min的步驟。