本發明屬于生物技術檢測領域，具體涉及一種豬肺炎支原抗體檢測試劑盒及其制備方法，利用偶聯的豬肺炎支原體特異多肽抗原包被固相載體，制備的豬肺炎支原體特異多肽抗原ELISA檢測試劑盒用于豬肺炎支原體感染的臨床檢測，流行病學調查及免疫監測。本發明采用非蛋白多聚體定向偶聯豬肺炎支原體特異多肽抗原作為包被液，有效提高多肽與目標抗體的結合效率，從而顯著提高可檢測靈敏度，同時顯著降低非特異背景讀值，特異性高，具有操作簡單，診斷速度快，在進行大規模檢測中經濟方便等優點，是一種便于普及的好方法，具有廣泛的應用前景。采用本發明的試劑盒檢測樣品，包被抗原用量可減至10ng/ml，降低了成本，有利于推廣使用。

1.一種豬肺炎支原抗體檢測試劑盒，其特征在于：包括被非蛋白多聚體定向偶聯豬肺炎支原體特異多肽抗原作為包被液包被的固相載體；陽性血清和陰性血清各1管，其中陽性血清為Mhp標準陽性血清稀釋液，陰性血清為Mhp標準陰性血清稀釋液；用辣根過氧化物酶標記羊抗豬IgG的稀釋液的酶標二抗1瓶；抗體稀釋液1瓶；底物顯色液1瓶；終止液1瓶;所述的非蛋白多聚體定向偶聯豬肺炎支原體特異多肽抗原作為包被液是由偶聯多肽抗原用包被液按照5μg/ml-10μg/ml的濃度稀釋，其中偶聯多肽抗原是通過以下方法制備得到的：1）選取豬肺炎支原體特異反應原性多肽溶解，得到多肽溶液；2）取非蛋白多聚體溶解，得到非蛋白多聚體溶液；3）在豬肺炎支原體特異多肽溶液或非蛋白多聚體溶液中加入偶聯劑，混合均勻；4）將豬肺炎支原體特異多肽溶液與非蛋白多聚體溶液混合均勻，攪拌反應，使豬肺炎支原體特異多肽偶聯到非蛋白多聚體上；5）用透析袋去除未參與結合的偶聯劑，純化，凍干，得到偶聯豬肺炎支原體特異多肽；其中豬肺炎支原體特異反應原性多肽為SEQ?ID?NO:1。2.根據權利要求1所述的豬肺炎支原抗體檢測試劑盒，其特征在于：所述非蛋白多聚體定向偶聯豬肺炎支原體特異多肽抗原作為包被液包被的固相載體是將偶聯豬肺炎支原體特異多肽抗原用包被液稀釋，然后將稀釋的偶聯豬肺炎支原體特異多肽抗原包被至少8孔的酶標板，每孔100μL，4℃過夜包被，用PBST洗滌液250μl/孔洗滌2-4次后拍干，用封閉液150μl/孔，37℃封閉1h，洗滌液PBST?250μl/孔洗滌2-4次后拍干，放入真空袋中，加入干燥劑，抽真空，4℃保存；所述包被液為1.59g?Na₂CO₃，2.93g?NaHCO₃溶于800mL雙蒸水中，調節pH值至9.6，并定容至1000mL。3.根據權利要求1所述的豬肺炎支原抗體檢測試劑盒，其特征在于：所述辣根過氧化物酶標記羊抗豬IgG的稀釋液是用HRP保護液按照辣根過氧化物酶標記羊抗豬IgG與HRP保護液體積比為1﹕2000-10000的比例稀釋，酶標二抗每瓶量為12ml；所述HRP保護液為0.1%BSA?1.0g，0.25%EDTA?2.5g，加PBS至?1000ml。4.根據權利要求1所述的豬肺炎支原抗體檢測試劑盒，其特征在于：所述Mhp標準陽性血清稀釋液是用抗體稀釋液按照體積比為1:2-128的比例將Mhp標準陽性血清稀釋，每管量為1ml?；Mhp標準陰性血清稀釋液用抗體稀釋液按照體積比為1:?2-128的比例將Mhp標準陰性血清稀釋，每管量為1ml。5.根據權利要求1所述的豬肺炎支原抗體檢測試劑盒，其特征在于：所述抗體稀釋液為0.1%BSA?1.0g加入PBS至?1000ml；每瓶量為12ml。6.根據權利要求1所述的豬肺炎支原抗體檢測試劑盒，其特征在于：所述底物顯色液為50mg?TMB?，10mL?DMSO，9.8g檸檬酸和1.2ml?30%?H₂O₂?加蒸餾水定容至1000ml；每管量為12ml。7.根據權利要求1所述的豬肺炎支原抗體檢測試劑盒，其特征在于：所述終止液包括雙蒸水178.3mL和98%的濃硫酸21.7mL，每管量為6ml。8.根據權利要求1所述的豬肺炎支原抗體檢測試劑盒，其特征在于：其還包括1瓶洗滌液，所述洗滌液為0.2g?KH₂PO₄，2.9g?Na₂HPO₄·12H₂O，8.0g?NaCl，0.2g?KCl，0.5mL?Tween-20（0.05%?V/V），加雙蒸水定容至100ml，pH值為7.4。9.一種如權利要求1所述的豬肺炎支原抗體檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：包括以下步驟1）非蛋白多聚體定向偶聯豬肺炎支原體特異多肽抗原包被的固相載體的包被；2）抗體稀釋液配制；3）底物液顯色液配制；4）終止液配制；5）陰陽性血清稀釋；6）酶標二抗配制；7）試劑盒的組裝：將偶聯豬肺炎支原體特異多肽抗原包被至少8孔的酶標板1塊、陰陽性血清各1管、抗體稀釋液1瓶、酶標二抗1瓶、底物顯色液1瓶、終止液1瓶、操作說明書一份組裝成ELISA試劑盒。