本發明涉及動物疫病分子生物學檢測方法及檢測試劑領域，具體涉及一種豬傳染性胃腸炎病毒等溫擴增技術(NASBA)快速檢測用引物、試劑盒及其檢測方法。本發明根據豬傳染性胃腸炎病毒的基因序列，用ClustalW進行多重比對，分析序列的保守區，采用Primer5.0引物設計軟件，分別設計引物和探針，可特異性的實現快速對豬傳染性胃腸炎病毒的檢測與鑒別。配制各種反應溶液組成相應的檢測試劑盒。利用本發明的試劑盒具有作簡便，特異性強、靈敏度高、可重復性高，且沒有復雜的后處理，適用性廣等優點。

1.豬傳染性胃腸炎病毒等溫擴增技術快速檢測試劑盒，其特征在于：它包括NASBA-Ⅰ和NASBA-Ⅱ，可特異性的擴增豬傳染性胃腸炎病毒，其中：所述NASBA-Ⅰ包括NASBA擴增反應液管、NASBA反應酶Mix管、陽性對照管、陰性對照管和DEPC水管；NASBA擴增反應液管由以下反應液組成：序列為SEQ?ID?NO1的10?mmol/L的上游引物0.5?μL，序列為SEQ?ID?NO2的10?mmol/L的上游引物0.5?μL，NASBA??buffer緩沖液7.0?μL，1mmol/L的氯化鉀溶液?1.2μL，DEPC水??0.8?μL，合計10?μL，為單次反應的用量；NASBA反應酶Mix管由以下反應液組成：T7?RNA?聚合酶10μL，終濃度為40U；AMV?16μL，終濃度為8U;RNase?H?0.1μL，終濃度為0.2U;RNasin?5μL，終濃度為12.5UBSA?1.3μL,終濃度為2.6ug/μL，NASBA??buffer緩沖液17.6μL，合計50μL，為10次反應的用量；陽性對照管：為豬傳染性胃腸炎病毒標準毒株的陽性重組質粒，體積20μL/管；陰性對照：管內為豬傳染性胃腸炎病毒陰性的豬血清，體積50μL/管；DEPC水管：1mL～2mL；所述NASBA-Ⅱ包括雜交緩沖液、探針混合液、檢測濃縮液、顯色液、終止液、10×TBST緩沖液和酶標板；探針混合液：包含100nmol/L通用探針SEQ?ID?NO3，100nmol/L檢測探針SEQ?ID?NO4，體積比1:1。2.根據權利要求1所述豬傳染性胃腸炎病毒等溫擴增技術快速檢測試劑盒，其特征在于：所述NASBA??buffer緩沖液由以下成分組成：1mmol/L?的Tris-HCl?20μL,?1mmol/L?的氯化鎂?6μL，10mmol/L?的dNTP?50μL,?100mmol/L?的NTP，包括cNTP、gNTP、aNTP、tNTP各10μL，50mmol/L?的DTT?100μL，DMSO?75μL。3.權利要求1所述試劑盒用于豬傳染性胃腸炎病毒等溫擴增技術的非疾病診斷目的的快速檢測方法，包括以下步驟：1）待測樣品中核酸模板的提?。喝?00μL～300μL或200?mg～300?mg待檢樣品，可選用相應的市售商品化核酸提取試劑盒或實驗室常規使用的提取病毒核酸的方法提取樣待測品中的病毒基因組RNA，即為核酸模板；2）NASBA反應體系：取5μL步驟1）中核酸模板或陽性對照DNA或陰性對照DNA，分別加入?NASBA擴增反應液10μL，NASBA反應酶Mix?5μL，反應體系的總體積為20μL;3）NASBA擴增條件：將步驟2）配制好反應體系的PCR管于42℃恒溫反應90min，-20℃終止反應；4）結果檢測：取擴增產物5μL，雜交緩沖液43μL，探針混合液2μL，加入酶標板中，微微震動混勻后，42℃雜交1h，1×TBST緩沖液洗滌3～4次，280μL?/孔；加入檢測濃縮液，100μL/孔，37℃反應30min，1×TBST緩沖液洗滌3～4次，280μL/孔；加入顯色溶液，100μL/孔，室溫避光10min～15min后，加入終止液，100μL/孔，終止反應；酶標儀OD_405nm讀取吸光度值，OD_405nm值大于0.45判為陽性，反之，小于0.45判為陰性；或者，擴增反應產物直接進行核酸電泳，約在195bp處出現明顯擴增，判為陽性；反之，判為陰性。