本發明公開了一種特異性檢測植物乳桿菌的檢測方法及試劑盒。該檢測方法包括步驟：（1）提取基因組DNA；（2）以（1）所提取的DNA為模板，采用如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物進行PCR反應；（3）對（2）得到的擴增產物進行電泳檢測和結果判斷。該試劑盒包括序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的引物。該引物和方法檢測植物乳桿菌的靈敏度和準確度相比現有技術有大幅度提高。

1.一種特異性檢測植物乳桿菌（Lactobacillus?plantarum）的方法，其
特征在于，其包括如下步驟：
（1）提取待測樣品的基因組DNA；
（2）以步驟（1）所提取的基因組DNA為模板，采用核苷酸序列分別
如SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5
和SEQ?ID?NO.6所示的引物進行多重PCR反應，以擴增特征性片段；
（3）對步驟（2）得到的擴增產物進行電泳檢測并進行結果判斷；
其中，步驟（2）所述多重PCR反應的反應體系中包括濃度各為0.2～
0.5μmol/L的序列分別如SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?
NO.4、SEQ?ID?NO.5和SEQ?ID?NO.6所示的引物，0.1～0.3mmol/L的dNTP，
1×PCR緩沖液，0.5～1.5mmol/L的Mg²⁺，0.05～0.15U/μL的Taq?DNA聚合
酶和1.0～2.0ng/μL的DNA模板；
步驟（2）所述多重PCR反應的反應程序為：①94～95℃，4～5min；
②94～95℃，30～40s；③55～57℃，30～50s；④71～73℃，15～60s；步驟
②至④共20～30個循環；⑤71～73℃，8～10min；⑥3～5℃保存；
步驟（3）所述結果判斷的方法為在紫外凝膠成像儀下拍照成像，采用
序列如SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?
NO.5和SEQ?ID?NO.6所示引物的PCR反應產物，若同時存在101bp，189bp
和378bp的核酸片段，則說明待測樣品中存在植物乳桿菌；若不同時存在
101bp，189bp和378bp的核酸片段，則說明待測樣品中不存在植物乳桿菌。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）所述多重PCR
反應的反應體系中包括濃度各為0.4μmol/L的序列分別如SEQ?ID?NO.1、SEQ?
ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5和SEQ?ID?NO.6所示
的引物，0.2mmol/L的dNTP，1×PCR緩沖液，1mmol/L的Mg²⁺，0.05U/μL
的Taq?DNA聚合酶，2.0ng/μL的DNA模板。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）所述多重PCR
反應的反應程序為：①95℃，5min；②95℃，40s；③55℃，30s；④72℃，
30s；步驟②至④共25個循環；⑤72℃，8min；⑥4℃保存。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（3）所述的電泳為1%～
3%瓊脂糖凝膠電泳。
5.一種用于特異性檢測植物乳桿菌的試劑盒，其包括核苷酸序列分別
如SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5
和SEQ?ID?NO.6所示的引物。
6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括dNTP、
PCR緩沖液、Mg²⁺和Taq?DNA聚合酶中的一種或多種。
7.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括陽
性對照和/或基因抽提試劑。