本發(fā)明公開了一種牛支原體雙抗夾心ELISA檢測試劑盒，該試劑盒包括包被有牛支原體多克隆抗體的酶標(biāo)板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗牛支原體MbovP579蛋白的單克隆抗體，所述單克隆抗體是由雜交瘤細(xì)胞株1A2分泌的，所述雜交瘤細(xì)胞株1A2保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO：C2018219。本發(fā)明實現(xiàn)了針對牛支原體抗原的特異性檢測，且能夠檢出牛支原體的敏感度為10CFU/mL。通過對樣本進行預(yù)增菌處理，含低至1CFU/mL的牛支原體樣本均可以達到檢測敏感度標(biāo)準(zhǔn)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有操作簡便、人員技術(shù)水平要求低、主觀因素誤差小、設(shè)備簡單等優(yōu)點，可以快速實現(xiàn)大批量樣品的檢測分析。

1.一種牛支原體雙抗夾心ELISA檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括：包被有牛支原體多克隆抗體的酶標(biāo)板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗牛支原體MbovP579蛋白的單克隆抗體，所述抗牛支原體MbovP579蛋白的單克隆抗體是由雜交瘤細(xì)胞株1A2分泌的，所述雜交瘤細(xì)胞株1A2保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO：C2018219。2.如權(quán)利要求1所述的牛支原體雙抗夾心ELISA檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒還包括：封閉液、稀釋液、洗滌液、顯色液、終止液。3.權(quán)利要求1或2所述的試劑盒在非診斷目的檢測牛支原體中的應(yīng)用。4.一種非診斷目的檢測牛支原體的雙抗體夾心ELISA方法，其特征在于包括以下步驟：(1)稀釋純化后的牛支原體多克隆抗體并包被酶標(biāo)板；(2)洗滌酶標(biāo)板，加入封閉液，封閉酶標(biāo)板；(3)洗滌酶標(biāo)板，加入待檢樣本，進行反應(yīng)；(4)將辣根過氧化物酶標(biāo)記的單克隆抗體稀釋后加入酶標(biāo)板，進行反應(yīng)；(5)洗滌酶標(biāo)板，加入TMB底物，室溫避光顯色10min；(6)加入終止液，混勻后酶標(biāo)儀測定OD450nm值；(7)結(jié)果判定：測量孔/陰性孔≥2.1為陽性，其余孔為陰性，所述單克隆抗體是抗牛支原體MbovP579蛋白的單克隆抗體，它是由雜交瘤細(xì)胞株1A2分泌的，所述雜交瘤細(xì)胞株1A2保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO：C2018219。5.如權(quán)利要求4所述非診斷目的檢測牛支原體的雙抗體夾心ELISA方法，其特征在于：所述牛支原體多克隆抗體的包被濃度為250ng/孔。6.如權(quán)利要求4所述非診斷目的檢測牛支原體的雙抗體夾心ELISA方法，其特征在于：所述封閉液為含5％體積胎牛血清的PBS緩沖液。7.如權(quán)利要求4所述非診斷目的檢測牛支原體的雙抗體夾心ELISA方法，其特征在于：所述辣根過氧化物酶標(biāo)記的單克隆抗體的稀釋倍數(shù)是1：800體積比。8.如權(quán)利要求4所述非診斷目的檢測牛支原體的雙抗體夾心ELISA方法，其特征在于：所述待檢樣本在加入前還進行了預(yù)增菌處理，處理方法是，將待檢樣本經(jīng)0.45μm濾器過濾，以1:10體積比接種于牛支原體PPLO液體培養(yǎng)基，5％CO₂、37℃培養(yǎng)36h。