本發(fā)明公開了一種原奶或發(fā)酵乳中牛和馬源性檢測(cè)的引物和探針及試劑盒，引物和探針序列如下：牛源性檢測(cè)正向引物序列如SEQ ID No.1所示；馬源性檢測(cè)正向引物序列如SEQ ID No.2所示；兩源性檢測(cè)反向引物序列如SEQ ID No.3所示；牛探針序列如SEQ ID No.4所示；馬探針序列如SEQ ID No.5所示；質(zhì)控探針序列如SEQ ID No.6所示。本發(fā)明的引物、探針及試劑盒的特異性好、靈敏度高，可以實(shí)現(xiàn)原奶或發(fā)酵乳中牛源性、馬源性以及質(zhì)控同管檢測(cè)，并且可以進(jìn)行牛源性和馬源性的定量檢測(cè)。

1.原奶或發(fā)酵乳中牛源性和馬源性以及質(zhì)控同管檢測(cè)的引物和探針，其特征在于，引物和探針序列如下：牛源性檢測(cè)正向引物序列如SEQ ID No.1所示；馬源性檢測(cè)正向引物序列如SEQ ID No.2所示；兩源性檢測(cè)反向引物序列如SEQ ID No.3所示；牛探針序列如SEQ ID No.4所示；馬探針序列如SEQ ID No.5所示；質(zhì)控探針序列如SEQ ID No.6所示。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的原奶或發(fā)酵乳中牛源性和馬源性以及質(zhì)控同管檢測(cè)的引物和探針，其特征在于，牛探針、馬探針和質(zhì)控探針序列的5'端修飾有報(bào)告基團(tuán)，3'端修飾有淬滅基團(tuán)，報(bào)告基團(tuán)為FAM、HEX、ROX或CY5中的任意一種，淬滅基團(tuán)為TAMRA、BHQ1或BHQ2中任意一種。3.原奶或發(fā)酵乳中牛源性和馬源性以及質(zhì)控同管檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，該試劑盒中含有：SEQ ID No.1所示的牛源性檢測(cè)正向引物，SEQ ID No.2所示的馬源性檢測(cè)正向引物，SEQ ID No.3所示的兩源性檢測(cè)反向引物，SEQ ID No.4所示的牛探針，SEQ ID No.5所示的馬探針，SEQ ID No.6所示的質(zhì)控探針，Probe qPCR預(yù)混液，牛陽性標(biāo)準(zhǔn)品，馬陽性標(biāo)準(zhǔn)品。4.原奶或發(fā)酵乳中牛源性以及質(zhì)控同管檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，該試劑盒中含有：SEQ ID No.1所示的牛源性檢測(cè)正向引物，SEQ ID No.3所示的兩源性檢測(cè)反向引物，SEQ ID No.4所示的牛探針，SEQ ID No.6所示的質(zhì)控探針，Probe qPCR預(yù)混液，牛陽性標(biāo)準(zhǔn)品。5.原奶或發(fā)酵乳中馬源性以及質(zhì)控同管檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，該試劑盒中含有：SEQ ID No.2所示的馬源性檢測(cè)正向引物，SEQ ID No.3所示的兩源性檢測(cè)反向引物，SEQ ID No.5所示的馬探針，SEQ ID No.6所示的質(zhì)控探針，Probe qPCR預(yù)混液，馬陽性標(biāo)準(zhǔn)品。6.原奶或發(fā)酵乳中牛源性和馬源性以及質(zhì)控同管檢測(cè)的方法，其特征在于，步驟如下：(1)提取原奶或發(fā)酵乳的DNA；(2)檢測(cè)DNA的濃度和質(zhì)量，并將濃度稀釋至100-200ng/μL；(3)利用SEQ ID No.1～SEQ ID No.6的引物和探針對(duì)稀釋DNA進(jìn)行多重?zé)晒舛縋CR擴(kuò)增，利用牛和馬陽性標(biāo)準(zhǔn)品做陽性對(duì)照，利用滅菌的去離子水做陰性對(duì)照，利用DNA提取的空白對(duì)照做提取方法的對(duì)照組；(4)Real-time PCR反應(yīng)結(jié)束后，設(shè)置Threshold為自動(dòng)，讀取牛、馬和質(zhì)控相應(yīng)探針的Ct值以及陽性對(duì)照、陰性對(duì)照和空白對(duì)照的Ct；只有當(dāng)質(zhì)控Ct≤35和陽性對(duì)照Ct≤35，陰性對(duì)照和空白對(duì)照Ct為0時(shí)才可以進(jìn)行相應(yīng)探針源性結(jié)果的判定；當(dāng)相應(yīng)探針的Ct≤35，結(jié)果判定為具有相應(yīng)源性，同時(shí)有多個(gè)探針的Ct≤35，結(jié)果判定為具有相應(yīng)兩源性；(5)利用牛和馬陽性標(biāo)準(zhǔn)品做DNA定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線；(6)利用檢測(cè)乳制品的相應(yīng)源性的Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線中的公式可以得到乳制品中相應(yīng)源性的定量檢測(cè)結(jié)果。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的原奶或發(fā)酵乳中牛源性和馬源性以及質(zhì)控同管檢測(cè)的方法，其特征在于，Real-time PCR擴(kuò)增參數(shù)為：預(yù)變性溫度94℃，30s，變性溫度94℃，5s，退火延伸溫度60℃，31s，40循環(huán)。8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的原奶或發(fā)酵乳中牛源性和馬源性以及質(zhì)控同管檢測(cè)的方法，其特征在于，Real-time PCR反應(yīng)體系為：Probe qPCR預(yù)混液10μL、SEQ ID No.1所示的牛源性檢測(cè)正向引物0.5μL，濃度為10μmol/L；SEQ ID No.2所示的馬源性檢測(cè)正向引物0.5μL，濃度為10μmol/L；SEQ ID No.3所示的兩源性檢測(cè)反向引物1μL，濃度為10μmol/L；SEQ IDNo.4所示的牛探針1μL，濃度為10μmol/L；、SEQ ID No.5所示的馬探針1μL，濃度為10μmol/L和SEQ ID No.6所示的質(zhì)控探針1μL，濃度為10μmol/L；DNA 1μL，滅菌的去離子水4μL，總體積20μL。