一種供體角膜HBV和TP的熒光定量PCR檢測試劑盒及檢測方法。試劑盒由DNA提取試劑、DNA擴(kuò)增試劑和陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品組成。其中DNA擴(kuò)增試劑包括預(yù)混試劑，20X熒光探針增強(qiáng)劑，正、反向HBV引物，HBV熒光探針，正、反向TP引物，TP熒光探針，無核酸酶的蒸餾水，HBV和TP陰性對照與陽性對照；陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品為含有HBV正、反向引物擴(kuò)增的目的序列pUC57-HBV質(zhì)粒，含有TP正、反向引物擴(kuò)增的目的序列pUC57-TP質(zhì)粒。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了對臨床供體結(jié)膜組織標(biāo)本的完全閉管檢測，不需PCR后處理，避免了交叉污染；同時(shí)采用實(shí)時(shí)檢測，所得Ct值和原始模板數(shù)量完全呈線性相關(guān)，定量準(zhǔn)確率極高，相對誤差約為50％，足以適應(yīng)臨床核酸定量的要求。

1.一種供體角膜HBV和TP的熒光定量PCR檢測試劑盒，其特征在
于試劑盒由DNA提取試劑、DNA擴(kuò)增試劑和陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品組成；其中
DNA提取試劑為硅膠膜通用型DNA小提試劑盒；DNA擴(kuò)增試劑包括2.5
X?PCR預(yù)混試劑，20X熒光探針增強(qiáng)劑，正向及反向HBV引物，HBV熒
光探針，正向及反向TP引物，TP熒光探針，無核酸酶的蒸餾水，HBV陰
性對照，HBV陽性對照，TP陰性對照，TP陽性對照；陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品分
別為含有HBV正向和反向引物擴(kuò)增的目的序列的pUC57-HBV質(zhì)粒，含
有TP正向和反向引物擴(kuò)增的目的序列的pUC57-TP質(zhì)粒；上述的HBV和
TP的引物、熒光探針與陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品序列如下：
HBV：
正向HBV引物：TCCTGGCTATCGCTGGATGT
反向HBV引物：AGGCATAGCAGCAGGATGAAG
HBV熒光探針序列：FAM+CTGCGGCGTTTTATCATATTCC+TAMRA
HBV擴(kuò)增片段長度為66bp；
HBV陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品的目的序列為：
Tggccaaaattcgcagtccccaacctccaatcactcaccaacctcttgtcctccaacttgtcctggctatcgctgg
atgtgtctgcggcgttttatcatattcctcttcatcctgctgctatgcctcatcttcttgttggttcttctggactaccaa
ggtatgttgcccgtttgtcctctacttccaggaacatcaactaccagcacgggaccatgcagaacctgcacgatt
cctgctca
HBV陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品的目的基因的片段長度為240bp；
TP：
正向TP引物：ATCCGGCATATGTCCAAGCT
反向TP引物：TGTGAGCGTCTCATCATTCCA
TP熒光探針序列：FAM+TCATGCACCAGCTTCGACGTCT+TAMRA
TP擴(kuò)增片段長度為65bp
TP陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品的目的序列為：
gtgtacatgtgcacgtagcactaatgtcgagactgaaaaggagtgcacagaacagcatggggtatctgcatctg
ctgtgcaggatccggcatatgtccaagctgtcatgcaccagcttcgacgtctttggaatgatgagacgctcacac
ttgttatgcataatggaaagtttgattatcacgttatgcatcgtgcaggcgtttttgagcactgtgcatgtaatattttc
gatacgatggt
TP陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品的目的基因的片段長度為240bp。
2.權(quán)利要求1的檢測試劑盒應(yīng)用于臨床眼庫供體少量結(jié)膜組織標(biāo)本中
的HBV和TP的檢測。