本發(fā)明公開了鑒別阿膠中多種動物源性的引物探針組合物，該組合物特異性好，靈敏度高。本發(fā)明還公開了含有該探針和引物的試劑盒，該試劑盒能同時鑒定阿膠中驢、馬、牛和豬4種動物源性成分，準(zhǔn)確度高、高通量、使用方便，本發(fā)明還公開了一種鑒別阿膠中多種動物源性的多重實(shí)時熒光定量PCR檢測方法，該方法能同時對阿膠中驢、馬、牛和豬4種動物成分進(jìn)行定性檢測，既適用于動物皮張類檢測，也適用于深加工的阿膠中動物源性檢測，方便快捷。

1.一種鑒別阿膠中多種動物源性的組合物，其特征是，包括2對擴(kuò)增引物和4種特異探
針，如下：
第一擴(kuò)增引物：牛和豬通用的引物
上游引物：5' AAGACGAGAAGACCCTATGGAG 3'
下游引物：5' CTCCGAGGTCACCCCAACCGAA 3'
第二擴(kuò)增引物：驢和馬通用的引物
上游引物：5' TTTCTCCTCGCATAAGCCTATATC 3'
下游引物：5' GTTCCTTTTACTTCTTTTAATCTTTCCT 3'
驢特異探針：5'CCAACATACAAACCTAACCCTCAGGGAGTTGG 3'
馬特異探針：5'CGCCAACACACAAACCTAACCTTCAGGGACTGGCG 3'
豬特異探針：5'CGGATGGTTAAACAACTCAACCACAAAGGGCATCCG3'
牛特異探針：5'CGGCGGCCCAAAGAGAATAGATTTAACCACCGCCG3'。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征是：還包括內(nèi)參照引物和內(nèi)參照探針，如下：
內(nèi)參照引物：
上游引物：5’-CCTGAGAAACGGCTACCAT-3’
下游引物：5’-CGTGTCAGGATTGGGTAAT-3’
內(nèi)參照探針：5’TGCGCGCCTGCTGCCTTCCT-3’。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征是：所述特異探針和內(nèi)參照探針的5’端修
飾有報告基團(tuán)，3’端修飾有淬滅基團(tuán)。
4.一種鑒別阿膠中多種動物源性的試劑盒，其特征是：包括權(quán)利要求1、2或3所述的鑒
別阿膠中多種動物源性的組合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征是：還包括PCR緩沖液、MgCl₂、dNTPs、Taq酶和超
純水。
6.一種鑒別阿膠中多種動物源性的多重實(shí)時熒光定量PCR檢測方法，其特征是：使用權(quán)
利要求4或5中所述的鑒別阿膠中多種動物源性的試劑盒鑒別阿膠的成分來源。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的多重實(shí)時熒光定量PCR檢測方法，其特征是：能夠同時鑒別阿
膠是否含有驢、馬、豬、牛源性成分。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的多重實(shí)時熒光定量PCR檢測方法，其特征是包括以下步驟：
（1）提取阿膠的基因組DNA，備用；
（2）將提取的基因組DNA加入試劑盒中，利用多重實(shí)時熒光定量PCR法檢測；
（3）收集PCR擴(kuò)增過程中的熒光信號，通過所得擴(kuò)增曲線鑒定阿膠中是否含有驢、馬、
豬、牛源性成分。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的多重實(shí)時熒光定量PCR檢測方法，其特征是：PCR擴(kuò)增條件為：
95℃ 1min； 95℃ 10s，60℃+3℃，35s，在此收集熒光信號，45個循環(huán)。