本發明公開了一種豬偽狂犬病等溫PCR現場快速檢測試劑盒，由一套引物、10倍環介導等溫擴增反應液、DNA聚合酶、陽性對照、陰性對照和顯色劑組成；所述的一套引物是由一對引物和一對內引物組成。采用本發明可以定性定量檢測豬偽狂犬病。本發明利用Bst DNA酶的鏈置換特性，設計4條引物，識別靶序列的6個區域，在等溫條件下生成大量重復的莖環狀結構，在定性檢測時不需任何特殊設備，只需眼觀反應管道顏色變化即可判定，因此具有特異性、敏感性高和檢測時間比普通PCR短、適用于豬場現場的快速檢測等特點。

1.一種豬偽狂犬病等溫PCR現場快速檢測試劑盒，其特征在于，
由一套引物、10倍環介導等溫擴增反應液、DNA聚合酶、陽性對照、陰性對照和顯色劑組
成；所述的一套引物是由一對引物和一對內引物組成，其序列為：
引物1：TCCGGATCTACCTCGACG
引物2：CCTCCTCGCTCAGGCT
內引物1：TCGGCTCGGGCACGTACAGCTACGGCACCGGCAAGA
內引物2：CGTACTGGCGCACTCTGTTCGGTTCTGCTTCCGGGTCTGC
其中，所述的一對引物與一對內引物的摩爾數之比為1∶6～9；所述的DNA聚合酶為具有
鏈置換作用的BstDNA聚合酶，活力為8個活性單位/微升；所述的陽性對照為含有插入豬偽
狂犬病一段特異序列的陽性質粒，環介導等溫擴增反應擴增區位于該特異序列中，其濃度
為10⁷拷貝/μL；所述的陰性對照為滅菌雙蒸水；所述的顯色劑為20倍SYBRGreenI，所述的
陽性質粒的制作方法為：采用PCR擴增一段豬偽狂犬病TK基因特異序列，然后裝入PMD18-T
載體，轉化至DH5α感受態細菌，抽取質粒DNA經序列確定后，采用紫外分光光度計測定質粒
DNA的濃度并用滅菌雙蒸水調整拷貝數至10⁷拷貝/μL。
2.根據權利要求1所述的豬偽狂犬病等溫PCR現場快速檢測試劑盒，其特征在于，所述
的10倍環介導等溫擴增反應液是由200mM三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽、100mM氯化鉀、100mM硫
酸銨、40～100mM硫酸鎂、4～10M甜菜堿、5～18mM的dNTPs、和質量百分濃度0.1％的Triton
X-100組成。
3.根據權利要求2所述的豬偽狂犬病等溫PCR現場快速檢測試劑盒，其特征在于，所述
的dNTPs為含有四種dNTP的等量混合物。
4.根據權利要求1所述的豬偽狂犬病等溫PCR現場快速檢測試劑盒，其特征在于，所述
的SYBRGreenI為高靈敏度的DNA熒光染料。