永久免费黄色大片-乱老胖熟妇60XXXXXX-亚洲成人手机AV-久久鬼色-三级片视频网站在线观看-韩日成人午夜

您現在的位置: 首頁 > 技術轉讓 > 番茄種傳病原多重PCR檢測試劑盒及其檢測方法

番茄種傳病原多重PCR檢測試劑盒及其檢測方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-19
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

專利推薦

  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201310453155.6 
  • 技術(專利)名稱 番茄種傳病原多重PCR檢測試劑盒及其檢測方法 
  • 項目單位 甘肅出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫綜合技術中心
  • 發明人 文朝慧,王軍平,周小平,李儒,劉雯 
  • 行業類別 中藥材獲取-非動植物采選
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 鄭俊燕
  • 發布時間 2021-12-19  
  • 01

    項目簡介

    本發明屬于生物技術領域,涉及一種番茄病害的檢測方法,主要針對番茄的三種重要種傳病原馬鈴薯紡錘塊莖類病毒、鳳果花葉病毒和煙草環斑病毒的同時檢測。一種番茄種傳病原多重PCR檢測試劑盒,番茄種傳病原為馬鈴薯紡錘塊莖類病毒、鳳果花葉病毒或煙草環斑病毒,其主要特點在于包括以下組分:RT-PCR buffer;馬鈴薯紡錘塊莖類病毒PSTVd上下游引物,鳳果花葉病毒PepMV上下游引物,煙草環斑病毒TRSV上下游引物;反轉錄酶及DNA聚合酶Mix;無RNA酶的去離子水;馬鈴薯紡錘塊莖類病毒、鳳果花葉病毒和煙草環斑病毒無侵染活性的陽性對照。本發明的優點是能同時檢測番茄3種重要種傳病原,快速準確,避免了常規PCR檢測的重復操作。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種番茄種傳病原多重PCR檢測試劑盒,番茄種傳病原為馬鈴薯紡錘
    塊莖類病毒、鳳果花葉病毒或煙草環斑病毒,其特征在于包括以下組分:
    RT-PCR?buffer,2×RT-PCR?buffer,100-250μL;RT-PCR擴增引物為
    馬鈴薯紡錘塊莖類病毒PSTVd上游引物,濃度為10μmol/L,10-30μL;馬
    鈴薯紡錘塊莖類病毒PSTVd下游引物,濃度為10μmol/L,10-30μL;鳳果
    花葉病毒PepMV上游引物,濃度為10μmol/L,10-30μL;鳳果花葉病毒PepMV
    下游引物,濃度為10μmol/L,10-30μL;煙草環斑病毒TRSV上游引物,濃
    度為10μmol/L,10-30μL;煙草環斑病毒TRSV下游引物,濃度為10μmol/L,
    10-30μL;反轉錄酶及DNA聚合酶Mix,20μL;無RNA酶的去離子水,100
    μL-1mL;陽性對照,馬鈴薯紡錘塊莖類病毒PSTVd、鳳果花葉病毒PepMV
    和煙草環斑病毒TRSV無侵染活性的陽性對照各20-60μL;所述的RT-PCR
    擴增引物為:
    馬鈴薯紡錘塊莖類病毒PSTVd上游引物為:5′
    -ATTCCCGCCGAAACAGG-3′;
    PSTVd下游引物為:5′-CCCGAAGCAAAGAAGATAGAGAAA-3′;鳳果花葉
    病毒PepMV上游引物為:5′-ATGAGGTTGTCTGGTGAAGGTC-3′;PepMV
    下游引物為:5′-AATTCCGTGCACAACTATGATTC-3′;煙草環斑病毒
    TRSV上游引物為:5′-CTTGCGGCCCAAATCTATAA-3′;TRSV下游引物
    為:5′-ACTTGTGCCCAGGAGAGCTA-3′。
    2.一種番茄種傳病原多重PCR檢測方法,其特征在于包括有:
    1)總核酸提?。?br/>2)RT-PCR反應體系為50μL,其中2×RT-PCR?buffer?25μL,RT/Taq?
    Mix1.0-2.0μL,馬鈴薯紡錘塊莖類病毒PSTVd上游引物5′-
    ATTCCCGCCGAAACAGG-3′10μmol/L?0.6-1.6μL,PSTVd下游引物5′-
    CCCGAAGCAAAGAAGATAGAGAAA-3′10μmol/L?0.6-1.6μL;鳳果花葉病
    毒PepMV上游引物5′-ATGAGGTTGTCTGGTGAAGGTC-3′10μmol/L?0.2-
    1.0μL;PepMV下游引物為:5′-AATTCCGTGCACAACTATGATTC-3′10μ?
    mol/L?0.2-1.0μL;煙草環斑病毒TRSV上游引物5′-
    CTTGCGGCCCAAATCTATAA-3′10μmol/L?0.2-1.0μL;TRSV下游引物5′
    -ACTTGTGCCCAGGAGAGCTA-3′10μmol/L?0.2-1.0μL;總RNA模板2.5-
    8μL,滅菌去離子水補足反應總體積;
    3)RT-PCR反應條件為:
    cDNA合成:50℃30min,1個循環;
    PCR擴增:94℃預變性3min;94℃變性30s,50℃退火45s,72℃
    延伸1min,35個循環;最后72℃延伸10min;
    4)RT-PCR擴增產物電泳檢測:用TAE電泳緩沖液制備1.5%瓊脂糖凝
    膠,在室溫下進行水平電泳;加10μL
    PCR擴增產物,以健康番茄總核酸的反轉錄PCR產物為陰性對照,以DL?1000
    Marker為標準分子量;100V/80mA下電泳30min,用SYBR?Safe代替EB染色,
    用凝膠成像系統觀察并拍照,馬鈴薯紡錘塊莖類病毒擴增產物為一條163bp
    的條帶,鳳果花葉病毒擴增產物為一條625bp的條帶,煙草環斑病毒擴增產
    物為一條348bp的條帶。
    3.如權利要求2所述的番茄種傳病原多重PCR檢測方法,其特征在于所
    述的核酸提取包括有如下步驟:
    (1)取感染馬鈴薯紡錘塊莖類病毒、鳳果花葉病毒或煙草環斑病毒的
    番茄葉片;稱取0.1g感染病毒樣品組織倒在潔凈的研缽內,加液氮研磨
    成粉末狀;
    (2)移入1.5mL離心管中,然后加入1mL的TRIzol,劇烈振蕩3min
    以上;
    (3)在4℃下,12?000rpm離心10min以除去不溶成分,將上清
    液轉入另一新的1.5mL離心管中;
    (4)在室溫下靜置5min,加0.2mL氯仿/mL?TRIzol,劇烈振蕩15s,
    然后在室溫下靜置15min,再于4℃、12?000rpm的條件下離心15min;
    (5)將上層水相轉移到新的1.5mL離心管中,加0.5mL異丙醇/mL
    TRIzol,上下顛倒混勻,室溫靜置15min;
    (6)4℃、12?000rpm離心10min;
    (7)棄上清,加入75%的乙醇洗滌沉淀,然后4℃、7?500rpm離心
    2min,棄乙醇;
    (8)沉淀在室溫下干燥10min或在冷凍離心濃縮機上濃縮5min,加
    入30μL無RNase水溶解,-70℃保存備用。
    展開

專利技術附圖

服務流程

過戶資料

  • 買賣雙方需提供資料
  • 平臺提供
  • 過戶后您將獲得
  • 買家
  • 賣家
  • 公司
  • 企業營業執照
  • 企業營業執照

    專利注冊證原件

  • 個人
  • 身份證

    個體戶營業執照

  • 身份證

    專利注冊證原件

  • 專利代理委托書

    轉讓申請書

    轉讓協議

  • 手續合格通知書

    專利證書

    專利利登記簿副本

安全保障

  • 品類齊全

    海量資源庫,平臺整合幾十萬閑置資源。
  • 交易保障

    完善的資金保障體系確保買賣雙方資金安全。
  • 專人跟進

    專業交易顧問全程服跟進,確保交易流暢。
  • 快速響應

    專業在線/電話客服服務,快速響應貼心服務。
  • 售后無憂

    資質過硬,國內大知識產權服務平臺。
  • -我要咨詢-
  • ×
聯系人:
專利名稱: *
聯系電話: *
驗證碼:

提交

關于我們 | 聯系我們

傳真:0435-3213171 電話:18801213919 郵箱:lizhiwen@bayuegua.com 地址:吉林省通化市東昌區新華大街1003號(通化市科技成果轉化中心)


舉報電話:0435-5112631     舉報郵箱:chenwenbo@bayuegua.com

備案號ICP備18003140號-1
主站蜘蛛池模板: 亚洲精品乱码久久久久久蜜桃麻豆 | 中文字幕欧美人乱人精品A片 | 毛片免费播放 | 成人午夜福利视频镇东影视 | 亚洲AV成人无码一区二区在线 | 精品人妻一区二区三区浪潮无限 | 成人无码区免费AV毛片 | 无码精品一区二区三区四区爱奇艺 | 国产麻豆精品久久一二三 | 9l视频自拍九色9l视频 | 国产一区| 国产亚洲精品久久久久苍井松 | 国产十日韩十成人 | 2025久久偷拍| 69精品人人人人人人人人人 | 无码日本精品久久久久久蜜桃 | av五码在线网 | 黄色一级片网站 | 成人精品午夜无码免费视小黄人 | 无码精品专区 | 三级视频网址 | 国产精品一二 | 亚洲AV无码一区二区三区大学生 | 熟女人妻のav中文字幕 | 精品无码人妻一区二区三区品 | 黄色网址在线观看免费 | 亚洲精品无码一区二区牛牛 | 开心色99 | 国产三级在线观看 | 特级西西444www无码视频免费看 | 成人亚洲精品一区二区三区嫩花 | 国产精品偷乱一区二区三区 | 国产91玉足脚交在线播放 | 三级片在线收看 | 国产三级黄色视频在线观看 | HEYZO北条麻妃M痴女在线 | 性做久久久久久免费观看欧美 | 国产麻豆成人精品AV | 三级电影免费观看 | 免费黄色大片网址 | 999zyz玖玖资源站永久无码 |