本發(fā)明公開了一種基于CRISPR的大腸桿菌ST131系菌株檢測引物、試劑盒及檢測方法，屬于分子生物學技術(shù)領(lǐng)域。該引物針對CRISPR3位點基因序列或者與該序列同源性達95％以上的同源序列設(shè)計合成，具體見序列表中SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2。本發(fā)明中檢測方法以待測樣本基因組DNA或單菌落為模板，利用上述引物進行PCR擴增，擴增產(chǎn)物與陽性對照有相同條帶的判定為疑似陽性，回收疑似陽性的擴增產(chǎn)物，進行測序分析，檢測出SEQ ID NO.4所示序列的判定為大腸桿菌ST131系菌株陽性。該檢測方法操作簡單，靈敏度高，特異性好，檢測結(jié)果準確、可靠。

1.大腸桿菌ST131系菌株的非診斷目的的檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：1）以待測樣本基因組DNA或單菌落為模板，利用引物進行PCR擴增，擴增產(chǎn)物經(jīng)電泳分析與陽性對照有相同條帶的判定為疑似陽性；2）回收疑似陽性的擴增產(chǎn)物，進行測序分析，檢測出SEQ ID NO.4所示序列的判定為大腸桿菌ST131系細菌陽性；步驟1）中引物如下所示：上游引物：5'-TTGTYAGGTAGGTTGGTGAAG-3'，Y為C或T；下游引物：5'-GCGAAGAGAAAGAACGAGTA-3'。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于：當以待測樣本基因組DNA為模板時，步驟1）中PCR擴增的反應體系為：2×Taq PCR Master Mix 12.5μL，8μmol/L上、下游引物各1μL，5~10ng/μL待測樣本DNA 2μL，滅菌超純水8.5μL，總計25μL。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于：當以待測樣本單菌落為模板時，步驟1）中PCR擴增的反應體系為：2×Taq PCR Master Mix 12.5μL，8μmol/L上、下游引物各1μL，單菌落，1×PCR菌落增強劑2.5μL，補加滅菌超純水至25μL。4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的檢測方法，其特征在于：步驟1）中PCR擴增的反應程序為：94℃預變性5min；94℃變性60s，56℃退火60s，72℃延伸1min，共32個循環(huán)；72℃繼續(xù)延伸10min。