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一種誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)細(xì)胞的方法

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-11-29
  • 技術(shù)成熟度:通過中試
交易價(jià)格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實(shí)
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào) CN201610871283.6 
  • 技術(shù)(專利)名稱 一種誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)細(xì)胞的方法 
  • 項(xiàng)目單位 浙江大學(xué)
  • 發(fā)明人 郭國(guó)驥,韓曉平,李俠,張芬,岑燕紅 
  • 行業(yè)類別 中藥材獲取-非動(dòng)植物采選
  • 技術(shù)成熟度 通過中試
  • 交易價(jià)格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 朱森林
  • 發(fā)布時(shí)間 2021-11-29  
  • 01

    項(xiàng)目簡(jiǎn)介

    本發(fā)明公開了一種誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)細(xì)胞的方法,步驟如下:(1)培養(yǎng)成纖維細(xì)胞20~30h;(2)將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含誘導(dǎo)小分子組合6TCF的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)6~8天,期間每2~4天更換一次培養(yǎng)基;(3)將細(xì)胞再轉(zhuǎn)移到含誘導(dǎo)小分子組合6TCF和8CFV的培養(yǎng)基中繼續(xù)7~16天,期間每2~4天更換一次培養(yǎng)基,獲得神經(jīng)細(xì)胞;其中,6為E616452、T為苯環(huán)丙胺、C為CHIR99021、F為毛喉素、8為A?83?01、V為丙戊酸。本發(fā)明通過在培養(yǎng)基中添加誘導(dǎo)小分子組合,能夠?qū)⒊衫w維細(xì)胞誘導(dǎo)轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)細(xì)胞,所得神經(jīng)細(xì)胞具有正常神經(jīng)細(xì)胞的特異性分子標(biāo)簽,并且具有正常神經(jīng)細(xì)胞的功能,為再生醫(yī)學(xué)的細(xì)胞來源問題提供一種新的途徑。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)細(xì)胞的方法,其特征在于,步驟如下:(1)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的制備步驟如下:1)培養(yǎng)器皿的預(yù)處理:以0.2%明膠覆蓋培養(yǎng)皿的底壁,室溫下放置30min后,將0.2%明膠吸出,室溫下備用;2)給孕13.5天的小鼠注射約0.5mL阿佛丁麻醉后,實(shí)施斷頸法處死小鼠,將其浸入75%酒精中消毒5分鐘;3)用75%乙醇擦拭腹部,剪開皮膚并把皮膚向后拉,暴露出腹壁,剪開腹壁以暴露出子宮,將子宮移到100mm的皿里,用10mL PBS洗三遍;4)用剪刀剪開胚囊,并將胚胎移到培養(yǎng)皿中;5)小心去除胚胎的頭和內(nèi)臟,將胚胎軀干部分轉(zhuǎn)移到青霉素小瓶中,用2mL PBS洗三遍;6)用眼科剪將組織剪碎,加入2mL的0.05%胰蛋白酶和0.02%EDTA,將懸液移入50mL離心管中,并在37℃孵育大約20min,每隔5min振蕩幾下;7)充分吹打后加入10mL培養(yǎng)基終止消化,靜置5min后,將上層約8mL的細(xì)胞懸液移入培養(yǎng)皿中,置37℃,5%CO2培養(yǎng)6h后,換液;8)細(xì)胞約90%匯合時(shí)傳代;(2)將步驟(1)制備的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞接種在35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿上,每個(gè)培養(yǎng)皿接種20000個(gè)細(xì)胞,其培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基;第二天,更換培養(yǎng)基,并加入誘導(dǎo)小分子組合6TCF,每4天更換一次添加誘導(dǎo)小分子組合6TCF的培養(yǎng)基;第9天至第24天,更換為添加誘導(dǎo)小分子組合6TCF和8CFV的培養(yǎng)基,第24天獲得神經(jīng)細(xì)胞;其中,誘導(dǎo)小分子組合6TCF中各組分的使用濃度為:5μM E616452、5μM苯環(huán)丙胺、10μMCHIR99021、10μM毛喉素;誘導(dǎo)小分子組合8CFV中各組分的使用濃度為:0.5μM A-83-01、10μM CHIR99021、10μM毛喉素、500μM VPA。
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專利技術(shù)附圖

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