本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞的誘導(dǎo)方法，采用以下步驟：將分離的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在MSC培養(yǎng)基中培養(yǎng)至鋪滿培養(yǎng)皿；取穩(wěn)定傳代的間充質(zhì)干細(xì)胞在鋪有胞外基質(zhì)的器皿中以MSC培養(yǎng)基培養(yǎng)至70％匯合；70％匯合的間充質(zhì)干細(xì)胞依次經(jīng)過添加有如下因子的四種誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)，5-氮胞苷+Pam3CSK4，bFGF+Noggin，bFGF+RA+FGF8+Wnt3a，Bmp4+Shh+RA+NGF+BDNF。本發(fā)明有益效果是不使用具有細(xì)胞毒性的化學(xué)物質(zhì)、不使用轉(zhuǎn)基因技術(shù)、不使用神經(jīng)細(xì)胞共培養(yǎng)、分化效率高、耗時(shí)較短。

1.一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞的誘導(dǎo)方法，其特征是采用以下步驟：
(1)將臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在MSC培養(yǎng)基中培養(yǎng)至鋪滿培養(yǎng)皿；
(2)取穩(wěn)定傳代的間充質(zhì)干細(xì)胞在鋪有胞外基質(zhì)的培養(yǎng)皿中以MSC培養(yǎng)基培養(yǎng)至
70％匯合；
(3)70％匯合的間充質(zhì)干細(xì)胞依次經(jīng)過添加有如下因子的四種誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)，
第一種誘導(dǎo)培養(yǎng)基：添加5-氮胞苷和三酰疊氮脂蛋白，
第二種誘導(dǎo)培養(yǎng)基：添加堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和Noggin蛋白，
第三種誘導(dǎo)培養(yǎng)基：添加堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、維甲酸、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)
因子8和Wnt3a蛋白，
第四種誘導(dǎo)培養(yǎng)基：添加骨成形蛋白4、Shh蛋白、維甲酸、神經(jīng)生長(zhǎng)因子和
腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子；
四種誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加因子的量分別為：
第一種：5-氮胞苷1-50uM和三酰疊氮脂蛋白0.1-1ug/ml，
第二種：堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1-200ng/ml和Noggin?1-500ng/ml，
第三種：堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1-200ng/ml、維甲酸0.5-50uM、成纖維
細(xì)胞生長(zhǎng)因子81-100ng/ml和Wnt3a蛋白1-500ng/ml，
第四種：骨成形蛋白4?1-200ng/ml、Shh蛋白1-500ng/ml、維甲酸0.5-50uM、
神經(jīng)生長(zhǎng)因子1-500ng/ml和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子1-500ng/ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于：四種誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加因子的量
優(yōu)選為
第一種：5-氮胞苷10uM和三酰疊氮脂蛋白0.5ug/ml，
第二種：堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子25ng/ml和Noggin?100ng/ml，
第三種：堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子25ng/ml、維甲酸10uM、成纖維細(xì)胞生
長(zhǎng)因子810ng/ml和Wnt3a?25ng/ml，
第四種：骨成形蛋白420ng/ml、Shh蛋白10ng/ml、維甲酸10uM、神經(jīng)生
長(zhǎng)因子10ng/ml和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子10ng/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于：四種誘導(dǎo)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為
添加有B27輔劑的Neurobasal或者添加有BIT9500的DMEM/F12。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于：MSC培養(yǎng)基組成為DMEM中添
加胎牛血清10％、谷氨酰胺2mM、青霉素和鏈霉素1％、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因
子和表皮生長(zhǎng)因子2ng/ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于：所述胞外基質(zhì)為1-100ug/ml層粘
連蛋白或者1-100ug/ml基質(zhì)膠的水溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于：在四種誘導(dǎo)培養(yǎng)基中各培養(yǎng)3天。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于：取穩(wěn)定傳代的間充質(zhì)干細(xì)胞在鋪
有胞外基質(zhì)的培養(yǎng)皿中以5×10³個(gè)細(xì)胞/cm²的密度培養(yǎng)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于：步驟(2)中取穩(wěn)定傳代的間充質(zhì)
干細(xì)胞在鋪有胞外基質(zhì)的培養(yǎng)皿中以MSC培養(yǎng)基培養(yǎng)24-48h。