本發明涉及一種簡便、快速的微生物分離方法，尤其是一種快速分離稻曲病菌的方法，屬于微生物技術領域。該方法將稻曲球在無菌水中刮洗除去稻曲球表層的雜菌，再用75％的乙醇溶液消毒30～60s、0.1％升汞水溶液浸泡消毒2～4min，用無菌水清洗，然后加入無菌水搗碎，用搗碎液沖洗分離用脅本哲氏培養基，風干培養基表面水份后，將培養皿置于恒溫箱28℃中黑暗培養，培養第6天后，用尖頭挑針挑取黃色或白色小菌落及白色菌絲移至培養用脅本哲氏培養基中純化培養10天，再將稻曲病菌移至PSA斜面培養基中培養10天后即可得到相應的稻曲病菌。本發明在短期內可從稻曲球中大量、快速、有效地分離出稻曲病菌，能有效解決稻曲病菌其它分離法中存在的污染、耗時、可靠性差、純化難度大等問題。

1.一種簡便的稻曲病菌快速分離方法，其特征在于：按照以下步驟進行（1）稻曲球標樣選擇：選取從田間采集的新鮮黃色稻曲球，或4℃冰箱中保存2個月內的稻曲球；（2）單粒稻曲球消毒：在無菌水中刮洗除去稻曲球表層的雜菌5次，再用重量比為75%的乙醇溶液消毒30～60s、重量比為0.1%的升汞水溶液浸泡消毒2～4min和無菌水清洗3次；（3）稻曲球搗碎液制備：單粒稻曲球在無菌培養皿和4?mL的無菌水中，用無菌手術刀搗碎消毒好的稻曲球組織后，制備含厚垣孢子和組織碎塊的稻曲球搗碎液；（4）稻曲球搗碎液沖洗平板：用移液槍吸取1mL搗碎液沖洗分離用脅本哲氏培養基表面，隨后用移液槍吸去殘余的搗碎液；（5）稻曲病菌分離：無菌通風條件下風干培養基表面水份后，將培養皿置于恒溫箱28℃中黑暗培養，逐日觀察分離結果；（6）稻曲病菌純化：培養第6天后，用尖頭挑針挑取黃色或白色小菌落及白色菌絲移至培養用脅本哲氏培養基中純化培養10天；（7）稻曲病菌保存：依據病菌在培養基的生長特性及其顯微觀察結果，將稻曲病菌移至PSA斜面培養基中培養10天后，保存于4℃冰箱中；所述分離用脅本哲氏培養基配方為馬鈴薯300g、蛋白棟5g、蔗糖?15g、Ca(NO₃)₂·4H---₂O?0.5g、Na-₂HPO--₄·12H_-20?2.0g、瓊脂16g、加水定容至1000mL，在121℃下高壓濕熱滅菌20~25min，待培養基冷卻至45℃~50℃時加入抑制細菌生長的氯霉素50μg/ml混勻，倒入培養皿中凝固后備用；所述培養用的培養基配方如下：培養用脅本哲氏培養基配方為馬鈴薯300g、蛋白棟5g、蔗糖?15g?、Ca(NO₃)₂·4H---₂O?0.5g、Na-₂HPO--₄·12H₂0?2.0g、瓊脂16g、加水定容至1000mL，PSA固體培養基配方為馬鈴薯200g、瓊脂20g、蔗糖20g、加水定容至1000mL，以上培養基均在121℃下高壓濕熱滅菌20min后備用。