本發明公開了梔子藍色素的制備方法。具體工藝步驟如下：（1）梔子葉培養基的制備，包括固體培養基制備和液體培養基制備；（2）曲霉液體種子制備，包括制備一級、二級和三級種子；（3）接種發酵，包括液固雙向發酵和液體發酵；（4）梔子苷酶解，包括液固雙向發酵物酶解和液體發酵物酶解；（5）梔子藍色素生成及純化。采用加氨基酸加熱使梔子苷苷元與氨基酸縮合生成梔子藍色素，用樹脂柱進行色素純化，最后得到藍黑色粉末，此即色價大于190(E1%1cm 590nm)的梔子藍色素。本發明利用梔子葉生產梔子藍色素，極大地降低了生產成本；本發明工藝簡便、穩定、生產設備投資可大可小，生產靈活，適合多種規模的企業投資。

1.梔子藍色素的制備方法，其特征在于工藝操作步驟如下：
（1）梔子葉固體培養基的制備
將新鮮的梔子葉洗滌，控干，粉碎，100~120℃滅菌20~120分鐘，冷卻既得固體培養基；
或將含水率1~20%的梔子葉，粉碎，按料液比1Kg:0.2~0.6L加水，混合攪拌5~30分鐘，溫度
100~120℃滅菌20~100分鐘，冷卻既得固體培養基；
（2）用黑曲霉制備活化原種、一級種子、二級種子，最后制得三級種子；
將黑曲霉（Aspergillus niger）接種于薩氏（SDAY）斜面培養基，溫度25～35℃、培養4
～7天，得到活化原種；
將活化原種接種到液體種子培養基，接種量為每200～1000mL培養基中接斜面菌種1
支；溫度25～35℃、轉速150～250 rpm條件下，震蕩培養3～7天，得到一級種子；
將一級菌種按體積比3～15%的接種量，擴大培養，溫度25～35℃、通氣量按體積比1:1
～1.5、壓力0.1～0.15MP條件下，培養3～7天得到二級種子；
將二級菌種按體積比3～15%的接種量，擴大培養，溫度25～35℃、通氣量按體積比1:1
～1.5、壓力0.1～0.15MP條件下，培養3～7天得到三級種子；
其中一級菌種、二級菌種和三級菌種的培養基均為液體種子培養基；
（3）接種發酵
將所述三級種子接種至梔子葉固體培養基中，接種量為每100Kg接種5~20L，溫度25～
35℃發酵培養2～7天，得到固體發酵物；
（4）梔子苷酶解
按料液比1Kg:0.5~5 L將固體發酵物加水打漿，溫度50～70℃、酶解4～16小時，得到梔
子苷酶解液；
（5）梔子藍色素生成及純化
在梔子苷酶解液中按每100L加入0.3~1.2Kg氨基酸，70～90℃保溫3～10小時，粗濾或
離心分離，對濾液或上清再進行微濾，接著將濾液泵入樹脂柱中，吸附飽和，用20～100%乙
醇洗脫或0.1～1mol/L的鹽酸洗脫，收集藍色洗脫液，脫去溶劑后得到藍黑色粉末，即為梔
子藍色素，所述梔子藍色素在590nm，1cm比色皿，1%濃度時的色價大于190。
2.梔子藍色素的制備方法，其特征在于具體制備操作步驟如下：
（1）梔子葉液體培養基的制備
將新鮮的梔子葉按料液比1 Kg:0.5~3 L加水混合打漿，在100~120℃，滅菌20~100分
鐘，冷卻既得液體培養基；或將含水率1~20%的梔子葉粉碎，按料液比1 Kg:1~6 L加水混合
攪拌5~30分鐘，溫度100~120℃滅菌20~100分鐘，冷卻既得液體培養基；
（2）曲霉液體種子制備
將黑曲霉（Aspergillus niger）接種于薩氏（SDAY）斜面培養基，溫度25～35℃、培養4
～7天，得到活化原種；
將活化原種接種到液體種子培養基，接種量為每200～1000mL培養基中接斜面菌種1
支；溫度25～35℃、轉速150～250 rpm條件下，震蕩培養3～7天，得到一級種子；
將一級菌種按體積比3～15%的接種量，擴大培養，溫度25～35℃、通氣量按體積比1:1
～1.5、壓力0.1～0.15MP條件下，培養3～7天得到二級種子；
將二級菌種按體積比3～15%的接種量，擴大培養，溫度25～35℃、通氣量按體積比1:1
～1.5、壓力0.1～0.15MP條件下，培養3～7天得到三級種子；
其中一級菌種、二級菌種和三級菌種的培養基均為液體種子培養基；
（3）接種發酵
將所述三級種子接種至梔子葉液體培養基中，接種量為每100Kg接種3~15L，溫度25～
35℃發酵培養2～7天，得到發酵液；
（4）梔子苷酶解
將發酵液升溫至50～70℃、酶解4～16小時，得到梔子苷酶解液；
（5）梔子藍色素生成及純化
在梔子苷酶解液中按每100L加入0.3~1.2Kg氨基酸，70～90℃保溫3～10小時，粗濾或
離心分離，對濾液或上清再進行微濾，接著將濾液泵入樹脂柱中，吸附飽和，用20～100%乙
醇洗脫或0.1～1mol/L的鹽酸洗脫，收集藍色洗脫液，脫去溶劑后得到藍黑色粉末，即為梔
子藍色素，所述梔子藍色素在590nm，1cm比色皿，1%濃度時的色價大于190。
3.根據權利要求1或2所述的梔子藍色素的制備方法，其特征在于：步驟（1）中所述梔子
葉粉過10-100目篩。
4.根據權利要求1或2所述的梔子藍色素的制備方法，其特征在于：步驟（2）中所述液體
種子培養基，每升培養基由蛋白胨或酵母提取物5～30g、淀粉或蔗糖10～5 0g、硝酸鉀或磷
酸二氫鉀1～3g、磷酸氫二鉀1～3 g、硫酸鎂1～3 g，加水定溶到1L制成。
5.根據權利要求1或2所述的梔子藍色素的制備方法，其特征在于：步驟（5）中所述粗濾
為過20~60目篩；所述離心分離為轉速2000~10000轉/分鐘、分離5~20分鐘；微濾的微濾膜截
留分子量為5000；所述氨基酸為谷氨酸鈉。