本發(fā)明公開(kāi)一種從貼底生長(zhǎng)的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251MG獲得細(xì)胞克隆球的方法，包括如下步驟：將腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞置于常規(guī)有血清培養(yǎng)基中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，讓細(xì)胞貼底生長(zhǎng)；培養(yǎng)7～20天后，收集懸浮腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞；離心處理懸浮腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞，棄去上清液，用HBSS液清洗剩余物；將清洗后的剩余物置于至少添加有生長(zhǎng)因子的無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)；培養(yǎng)10～20天后，即可獲得腦膠質(zhì)瘤克隆球，把懸浮的克隆球分離出來(lái)單獨(dú)培養(yǎng)，貼底的克隆球和貼底細(xì)胞仍在一起培養(yǎng)，并定期更換培養(yǎng)基，即會(huì)持續(xù)不斷地生長(zhǎng)出來(lái)新的克隆球。本發(fā)明方法簡(jiǎn)便，且不用消化酶，也不用機(jī)械方法制得單細(xì)胞懸液，可持續(xù)地獲得遺傳背景完全一致的干細(xì)胞克隆球；可廣泛用于干細(xì)胞理論研究、再生醫(yī)學(xué)、新藥開(kāi)發(fā)。

1.一種從貼底生長(zhǎng)的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251MG獲得細(xì)胞克隆球的方法，其特征在于，其包括如下步驟：步驟一、將腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞置于常規(guī)有血清培養(yǎng)基中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，讓腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞貼底生長(zhǎng)；步驟二、培養(yǎng)7～20天后，當(dāng)懸浮的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，完整的單個(gè)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞達(dá)到一定數(shù)量時(shí)，收集懸浮腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞；步驟三、將收集的懸浮腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞離心，棄去上清液，再用HBSS液清洗剩余物，該剩余物含有具有較強(qiáng)增殖能力的單個(gè)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞；步驟四、將清洗后的剩余物置于至少添加有生長(zhǎng)因子的無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)；步驟五、培養(yǎng)10～20天后，即可獲得直徑在50～100微米的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞克隆球，腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞克隆球部分呈懸浮狀，部分為貼底生長(zhǎng)，把懸浮的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞克隆球和貼底的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞克隆球及貼底腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞分開(kāi)培養(yǎng)，并定期更換培養(yǎng)基以維持培養(yǎng)基中有效成分的含量，培養(yǎng)瓶中即會(huì)持續(xù)不斷地生長(zhǎng)出來(lái)新的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞克隆球。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從貼底生長(zhǎng)的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251MG獲得細(xì)胞克隆球的方法，其特征在于：步驟一所用的常規(guī)有血清培養(yǎng)基通過(guò)在市售基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加質(zhì)量百分比為5～15％的胎牛血清制得。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從貼底生長(zhǎng)的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251MG獲得細(xì)胞克隆球的方法，其特征在于：步驟三中，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為1500～2000轉(zhuǎn)/分鐘，離心處理時(shí)間為3～5分鐘。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從貼底生長(zhǎng)的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251MG獲得細(xì)胞克隆球的方法，其特征在于：步驟三中，采用HBSS液清洗剩余物2～4次。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從貼底生長(zhǎng)的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251MG獲得細(xì)胞克隆球的方法，其特征在于：步驟四中，所述無(wú)血清培養(yǎng)基為市售的基礎(chǔ)干細(xì)胞培養(yǎng)基。6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的一種從貼底生長(zhǎng)的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251MG獲得細(xì)胞克隆球的方法，其特征在于：步驟四中，所述生長(zhǎng)因子采用bFGF、EGF、PDGF中的至少任意兩種，添加量為20～25ug/ml。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從貼底生長(zhǎng)的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251MG獲得細(xì)胞克隆球的方法，其特征在于：步驟五中，腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞克隆球采用手工方式取出。8.根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的一種從貼底生長(zhǎng)的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251MG獲得細(xì)胞克隆球的方法，其特征在于：步驟五中，5～15天需更換一次培養(yǎng)基。