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骨髓來源的巨噬細胞的體外誘導培養方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-28
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201210148116.0 
  • 技術(專利)名稱 骨髓來源的巨噬細胞的體外誘導培養方法 
  • 項目單位 中國人民解放軍第三軍醫大學
  • 發明人 張志仁,楊琴,楊曉風,姜曼,吳玉章 
  • 行業類別 中藥材獲取-非動植物采選
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 楊敏杰
  • 發布時間 2022-01-28  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及生物技術領域,特別涉及細胞的培養方法,骨髓來源的巨噬細胞的體外誘導培養方法,具體為將骨髓來源單細胞懸液在體外用含M-CSF的PRMI1640完全培養基培養,在加入培養基培養前,還包括骨髓來源單細胞懸液的預處理步驟,具體為:將所述骨髓來源單細胞懸液用濾孔為40~75μm的濾器過濾,取過濾液進行培養;本實施例中培養的巨噬細胞分化成熟所需的時間與原來相比縮短了1~2天;在細胞懸液的處理中,經過濾的細胞與未過濾的細胞相比,骨髓來源祖細胞的純度提高;未過濾的骨髓來源祖細胞的純度僅約為17%~20%,經過濾后,骨髓來源祖細胞的純度提升到30%-40%。
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  • 02

    說明書

    1.骨髓來源的巨噬細胞的體外誘導培養方法,其為將骨髓來源單個核細胞懸液在體外用培養基培養,其特征在于,具體包括以下步驟:?????A?骨髓來源的細胞混合液的制備?????用注射器吸取含有質量分數為0.05%的吐溫-20的pH7.4的PBS緩沖液插入離體動物股骨兩端的軟骨處沖出股骨內的骨髓,收集骨髓來源的細胞混合液;?????B?單個核細胞懸液的制備?????將步驟A所得的收集骨髓來源的細胞混合液混懸,得骨髓來源的單個核細胞懸液,用濾孔為40~75μm的濾器過濾,將過濾液在1000~1500rmp/min條件下離心5~10分鐘,去上清液,用含巨噬細胞集落刺激因子的PRMI1640完全培養基重懸細胞,制備細胞重懸液;?????C?第一階段細胞培養?????將步驟B所得細胞重懸液調節成濃度為1-2×106個/mL,置于培養箱中37℃、5﹪孵育24~30小時后,吸棄上清,另加入所述含巨噬細胞集落刺激因子的PRMI1640完全培養基,再培養48小時;?????D?第二階段培養在第一階段細胞培養完成后,不超過24小時對培養的細胞進行換液,另培養3~4日,得分化成熟的巨噬細胞;所述含巨噬細胞集落刺激因子的PRMI1640完全培養基中含巨噬細胞集落刺激因子的濃度為20ng/ml。
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